米諾環(huán)素對口頜面部炎性疼痛及p38MAPK通路作用的研究.pdf

1、口頜面部疼痛發(fā)病機制十分復雜，近年的研究發(fā)現(xiàn)疼痛的形成和發(fā)展與信號轉導的多條通路密切相關，其中p38MAPK信號轉導通路已成為研究熱點。大量的研究表明，p38MAPK通過對細胞轉錄、蛋白合成、受體表達等多方面的調(diào)節(jié)，在神經(jīng)元可塑性變化及疼痛信號轉導中起重要作用。因此深入分析p38MAPK在口頜面部病理性疼痛中的作用，將有助于我們更好的理解信號轉導在口頜面部疼痛中的功能，并為發(fā)現(xiàn)更有效的疼痛治療靶點提供依據(jù)。
　　 米諾環(huán)素多年來

2、作為一種抗生素藥物已成功地應用于人類感染性疾病和炎癥性疾病。最近在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究中發(fā)現(xiàn)米諾環(huán)素具有神經(jīng)保護作用，能夠抑制神經(jīng)病理性疼痛，那么，在口頜面部炎性疼痛中米諾環(huán)素是否起作用以及米諾環(huán)素的作用是否與p38MAPK通路有關成為值得研究的問題。
　　 目的：通過建立福爾馬林致口頜面部炎性疼痛模型，研究三叉神經(jīng)脊束核尾側亞核（Vc核）c-fos、GFAP和0X-42的變化時程，探討口頜面部炎性疼痛的中樞致敏機制；觀察Vc

3、核中p38MAPK磷酸化水平（活性）的變化及其特異性抑制劑SB203580的鎮(zhèn)痛療效，探討p38MAPK在口頜面部炎性疼痛中的作用；經(jīng)中樞和外周給予米諾環(huán)素，觀察米諾環(huán)素對福爾馬林致口頜面部炎性疼痛的作用，并通過觀察其對p38 MAPK活化的影響，探討米諾環(huán)素在口頜面部病理性疼痛的作用機制。
　　 材料和方法：采用雄性SD大鼠，在左上唇皮下注射2.5％福爾馬林50μ1建立口頜面部炎性疼痛模型。1.分別在造模后30、60、120、

4、240、360min各時間點，通過免疫熒光染色觀察各組大鼠Vc核c-fos、GFAP和0X-42表達的情況。2.在注射后10、20、30、40min各時間點用免疫蛋白印跡方法，檢測各組大鼠Vc核p38活化（p-p38）的變化情況；大鼠小腦延髓池內(nèi)置管后于造模前20min給予p38MAPK抑制劑SB203580，通過行為學和c-fos表達情況，觀察其鎮(zhèn)痛效果。3.各組大鼠在注射福爾馬林前1h腹腔注射米諾環(huán)素（60 mg/kg，90mg/k

5、g）或在注射福爾馬林前20 min小腦延髓池注射米諾環(huán)素（60μg，120μg），每組動物測定痛行為反應后，用免疫熒光染色和免疫蛋白印跡法分析各組大鼠同側Vc核c-fos，p-p38和0X-42表達的變化。
　　 結果：
　　 1.在左上唇皮下注射福爾馬林后，免疫組化及免疫熒光染色結果顯示fos陽性（fos-immunoreactivity，F(xiàn)os-IR）神經(jīng)元在注射后30min即可觀察到，120min達到峰值，到360

6、min觀察結束仍有較高的表達。GFAP-IR在福爾馬林注射后30min即有較高表達，60min達峰值后下降，240min即恢復到正常水平，二者分布區(qū)域相同。0X-42-IR 1d開始出現(xiàn)，3d后明顯，7d達到峰值，14d后開始減弱。
　　 2.在左上唇皮下注射福爾馬林后，Western blot結果顯示Vc核中總p38MAPK水平無明顯變化，但是p-p38水平明顯增加。p-p38在福爾馬林注射后10min即可以檢測到，20min

7、達高峰，之后逐漸下降。預先經(jīng)小腦延髓池注射p38MAPK抑制劑SB203580可以明顯抑制福爾馬林引發(fā)的第Ⅱ期疼痛行為反應，并且抑制疼痛引發(fā)的Vc核的c-fos表達。
　　 3.大鼠左上唇注射福爾馬林引起的痛行為反應包括兩期，預先腹腔（i.p.）或經(jīng)小腦延髓池（i.c.）注射米諾環(huán)素在較大劑量（i.p.90mg/kg，i.c.120μg）抑制福爾馬林引起的第Ⅱ期痛行為反應，但對第1期痛行為反應沒有作用。預先腹腔或小腦延髓池內(nèi)注射

8、米諾環(huán)素可以抑制福爾馬林注射后誘導的p-p38、c-fos和0X-42的表達，并呈現(xiàn)劑量依賴性。
　　 結論：
　　 1.在大鼠上唇皮下注射福爾馬林可以引發(fā)典型的二期疼痛反應，是較好的口頜面部炎性疼痛模型。
　　 2.在福爾馬林致口頜面部炎性疼痛模型中Vc核內(nèi)神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞（星形膠質(zhì)細胞、小膠質(zhì)細胞）先后被激活，相互作用，共同參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)對炎性疼痛刺激的調(diào)節(jié)。
　　 3.福爾馬林致口頜面部炎性疼痛模