p38MAPK在神經病理性疼痛中作用的研究.pdf

1、背景：慢性疼痛中神經病理性疼痛是最令醫(yī)生感到棘手的問題，其發(fā)病機制十分復雜，至今缺乏有效的治療措施。近十幾年來，人們致力于神經病理性疼痛分子生物學研究，力求尋找到治療這類頑疾的更有效的靶點。隨著研究的深入，科學家們發(fā)現(xiàn)信號轉導與神經病理性疼痛的關系可能成為新的切入點：細胞信號轉導是細胞對外界刺激做出應答反應的基本生物學方式，眾多研究證實神經病理性疼痛的形成與發(fā)展與信號轉導多條通路密切相關。近年來越來越多的證據(jù)表明外周神經損傷后，在神經病

2、理性疼痛出現(xiàn)的同時，MAPK(絲裂原激活的蛋白激酶)通路的某些重要信號轉導蛋白活性也發(fā)生明顯變化，因此MAPK信號轉導通路成為研究焦點。p38MAPK是MAPK通路中的關鍵信號轉導蛋白之一，其變化很可能影響“疼痛信號”的傳遞，深入分析p38MAPK在神經病理性疼痛中的作用，將有助于我們更好的理解信號轉導在疼痛中的功能，以期發(fā)現(xiàn)更新更有效的疼痛治療靶分子。 目的：通過建立坐骨神經結扎致神經病理性疼痛模型(CCI)，采用行為學、免疫

3、組織化學和免疫蛋白印跡方法，觀察CCI術后脊髓背角和DRG中p38MAPK磷酸化水平(活性)的變化，并鞘內注射p38MAPK特異性抑制劑SB203580觀察其鎮(zhèn)痛療效和對脊髓和背根神經節(jié)TNFα分泌的影響，探討p38MAPK在神經病理性疼痛中的作用。 第一部分神經病理性疼痛大鼠脊髓背角和背根神經節(jié)p38MAPK活化水平的改變材料與方法：Sprague-Dawley大鼠80只，六周齡、雄性、體重160-200克。隨機分為3組，即正

4、常對照組(n=14)、假手術組(n=24，其中14只于術后3天處死取組織，剩下10只進行痛閾測量)以及CCI組(n=42，其中CCI組又分為3、7、14天三個亞組，每組14只)。按Bennet和Xie等方法制作CCI模型，通過VonFreyfilament測定大鼠神經結扎側(左側)后足縮足反射閾值(MWT)。各組大鼠分別于術后3、7、14天處死，取脊髓和DRG，采用免疫組化和Westernblot方法測定脊髓背角和DRG中總p38MAP

5、K和磷酸化p38MAPK水平，并采用免疫熒光染色觀察脊髓小膠質細胞變化。 結論：1.外周神經損傷后，脊髓背角和DRG中p38MAPK活化水平增加，MAPK通路被激活，可能參與神經病理性疼痛的形成。 2.外周神經損傷后，脊髓小膠質細胞被激活，預示其在神經病理性疼痛中發(fā)揮重要作用。 第二部分p38MAPK抑制劑SB203580對神經病理性疼痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用及其對脊髓和DRG分泌TNF-α的影響方法：S-D大鼠64只，

6、六周齡、雄性、體重160-200克。隨機分為4大組，包括對照組(n=8)、假手術組(n=8)、CCI+saline組(n=24，又分為3d、7d和14d三個亞組，每組8只)和CCI+SB組(n=24，又分為術前1天給藥組、術后1天給藥組和術后7天給藥組三個亞組，每組8只)。CCI+saline組大鼠鞘內置管后給予生理鹽水治療，CCI+SB組大鼠鞘內置管后分別于手術前后不同時間給予p38MAPK抑制劑——SB203580治療(兩次/天，每

7、次2μg/20μl，持續(xù)7天)。通過VonFreyfilament測定大鼠縮足反射閾值，觀察鎮(zhèn)痛效果。各組大鼠在相應時間處死取脊髓和DRG，采用Westernblot方法測定脊髓背角和DRG中TNFα的含量變化。 結論：1.預先給予SB203580或術后立即給藥均可有效抑制疼痛，但是當疼痛持續(xù)存在后再給予p38MAPK抑制劑則無明顯療效。 2.CCI術后鞘內注射p38MAPK抑制劑——SB203580可以明顯緩解疼痛，因