蠟梅轉錄因子基因ANL2的克隆和功能探究.pdf

1、蠟梅（Chimonanthus praecoxL.），是蠟梅科蠟梅屬的一種觀賞性極強的樹種，素以于寒冬臘月傲雪盛放而名，花朵顏色淡雅，花香撲鼻，沁人心脾。在蠟梅的研究中，蠟梅品種分為素心蠟梅品種群、暈心蠟梅品種群和紅心蠟梅品種群，其中素心蠟梅花朵通體黃色，清新淡雅，而紅心蠟梅內被片呈紫紅色，中被片和外被片呈淡黃色，總體色彩層次有致，觀賞性極高。在擬南芥中，ANL2轉錄因子調控擬南芥葉片和莖中花青素的分布，蠟質的合成以及根部細胞發(fā)育。

2、r>　　本文對蠟梅ANL2轉錄因子進行探究，克隆到ANL2的全長片段，構建植株雙元表達載體pCAMB IA2300-CpANL，農桿菌介導法浸染擬南芥野生型、擬南芥突變體和煙草，得到轉基因植株，對轉基因植株的表型進行研究和分析。主要研究結果如下:
　　1.篩選轉錄組庫中的ANL2轉錄因子，克隆其全長，進行生物信息學分析，包括保守結構域分析，系統(tǒng)進化分析和蛋白質預測，命名為CpANL2。
　　2.提取素心蠟梅和紅心蠟梅不同花期

3、的RNA，反轉錄成cDNA，通過實時定量PCR測定CpANL2在不同蠟梅品種、不同花期和花朵不同部位的表達量差異。通過研究結果的分析，推測CpANL2可能調控類黃酮代謝通徑中影響槲皮素合成的上游基因的表達，進而影響花青素的合成。
　　3.構建CpANL2-pCAMBIA2300植物雙元表達載體，通過熱激法將目的基因轉入農桿菌GV3101中。采用花序浸染法浸染野生型擬南芥，獲得T1代陽性植株6株，T2代陽性植株40株，隨機選取24株

4、，提取DNA檢測，全部為陽性植株。采用花序侵染法侵染突變體擬南芥，得到T1代植株30株，隨機選取23株，提取DNA檢測，得到陽性植株21株。采用葉盤法浸染煙草，隨機選24株煙草抗性苗，提取DNA，經PCR檢測得到20株呈陽性的轉基因植株。
　　4.野生型擬南芥超量表達獲得的陽性植株，通過表型觀察，發(fā)現T1代植株葉片表面較野生型相比顏色深，莖干都呈現紫紅色，且有一株陽性植株葉片和莖干都呈現紫紅色，T2代陽性植株中葉柄和莖干都呈現紫紅