生物活性分子共價(jià)包被心臟植入裝置提高介入療效的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：體外評(píng)價(jià)殼聚糖(Chi)、殼聚糖/纖維連接素(Chi/Fn)、殼聚糖/肝素(Chi/Hep)、殼聚糖/重組水蛭素(Chi/r-Hir)共價(jià)包被鎳鈦合金片的生物相容性。 方法：本研究分成血液相容性實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞相容性實(shí)驗(yàn)兩部分。實(shí)驗(yàn)分為血液對(duì)照組、未包被組、基礎(chǔ)包被組(殼聚糖)、殼聚糖/纖維連接素(Fn)、殼聚糖/肝素(Hep)、殼聚糖/重組水蛭素(r-Hir)組；分別記為Control、Uncoating、Basiccoati

2、ng、Chi/Fn、Chi/Hep、Chi/r-Hir其中按纖維連結(jié)素、肝素、重組水蛭素不同濃度分成低、中、高三個(gè)劑量組。血液相容性實(shí)驗(yàn)：將上述生物活性分子共價(jià)交聯(lián)于實(shí)驗(yàn)用鎳鈦金屬表面，通過(guò)血液溶血試驗(yàn)，觀察紅細(xì)胞細(xì)胞毒性；通過(guò)檢測(cè)動(dòng)態(tài)全人血接觸試驗(yàn)后，各樣本部分凝血活酶活化時(shí)間(APTT)、凝血酶原時(shí)間(PT)、纖維蛋白原(Fg)、凝血酶時(shí)間(TT)、D-二聚體(DD)評(píng)價(jià)其抗血栓性能；掃描電子顯微鏡觀察鎳鈦金屬表面血小板吸附、聚集，

3、纖維蛋白生成。細(xì)胞相容性實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)分成A、B兩組，每組2片，將體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)種植于實(shí)驗(yàn)金屬表面，體外孵育72小時(shí)，分別進(jìn)行倒置顯微鏡觀察鎳鈦金屬細(xì)胞毒性；經(jīng)纖維連結(jié)素、Ki67免疫熒光標(biāo)記后，熒光顯微鏡觀察細(xì)胞黏附、增殖情況，并進(jìn)行熒光半定量分析。 結(jié)果：(1)血液相容性實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)各組紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板計(jì)數(shù)均在正常范圍內(nèi)且各組比較未見(jiàn)明顯差異，各組溶血率均小于5％(1.6-1.7％)。Uncoati

4、ng組、Chi組及Chi/Fn三組與Control組比較APTT、PT、TT值未見(jiàn)差異；Chi/Hep組和Chi/r-Hir組與Uncoating組、Chi組及Chi/Fn組相比，PT、APTT、TT均延長(zhǎng)；其中Chi/r-Hir組與Chi/Hep相比，APTT、TT明顯延長(zhǎng)， PT無(wú)差異(各組方差均齊，LSD及SNK檢驗(yàn)結(jié)果相同，P<0.005)，但不同濃度重組水蛭素組間TT、APTT表現(xiàn)明顯差異(方差不齊采用Dunnetts法P<0

5、.005)表明TT、APTT與重組水蛭素存在量效關(guān)系，隨著水蛭素濃度增加抗凝效果愈明顯，二者成正相關(guān)。但不同濃度肝素之間未見(jiàn)明顯差異。掃描電鏡結(jié)果顯示Chi組表面血小板黏附、聚集同時(shí)伴有纖維蛋白生成。Chi/Fn組和Chi/Hep組表面伴有少量血小板黏附、纖維蛋白生成，Chi/r-Hir組則明顯少于其它組。 (2)細(xì)胞相容性實(shí)驗(yàn)：經(jīng)過(guò)72小時(shí)孵育，倒置顯微鏡一般觀察見(jiàn)金屬邊緣細(xì)胞生長(zhǎng)、移行良好，未及細(xì)胞變形；纖維連接素免疫熒光標(biāo)記(胞漿

6、紅色)總體觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在鎳鈦金屬表面黏附分布不如在細(xì)胞培養(yǎng)板上良好。HUVECs黏附順序如下：Chi/Fn組>Basiccoaltirng組>Uncoating組>Chi/r-Hir組>Chi/ttep組，各不同濃度組間未見(jiàn)明顯差異；Ki67免疫熒光標(biāo)記未包被組與基礎(chǔ)包被組比較未見(jiàn)差異，排列順序如下：Chi/Fn組>Basiccoating組=Uncoating組>Chi/r-Hir組>Chi/Hep組，不同濃度組間未見(jiàn)明顯差異，且肝素