Ⅱ相關(guān)鍵解毒酶介導(dǎo)的對蝦中常見真菌毒素危害控制效應(yīng).pdf

1、T-2毒素、黃曲霉毒素B1(AFB1)、嘔吐毒素(DON)和赭曲霉毒素(OTA)是霉菌生長產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物，屬對蝦飼料中自然發(fā)生的常見真菌毒素，毒性強，不易清除，性質(zhì)穩(wěn)定，可引起對蝦疾病的發(fā)生以及生產(chǎn)性能下降、品質(zhì)降低等，給對蝦產(chǎn)業(yè)發(fā)展帶來極大危害，造成巨大經(jīng)濟損失的同時也具有潛在的食品安全風(fēng)險，有效控制其危害是亟待解決的熱點問題。因此，本研究根據(jù)生物轉(zhuǎn)化的原理，從誘導(dǎo)劑著手，通過Ⅱ相關(guān)鍵解毒酶的誘導(dǎo)表達，使對蝦體內(nèi)毒素殘留量降低，病

2、理損傷減輕，以達到降低常見真菌毒素的危害控制的目標。
　　總體研究思路是根據(jù)毒理學(xué)設(shè)計原理，采用劑量遞增法進行試驗設(shè)計，T-2、AFB1、DON和OTA四種真菌毒素的初始染毒劑量分別為4.8、1.2、6.0和1.78 mg/kg作為起始染毒劑量，每天染毒，4天為一周期，每期遞增1.5倍，連續(xù)染毒20天，并設(shè)置空白對照。另設(shè)置單獨誘導(dǎo)劑組，以槲皮素、蘆丁和茶多酚為誘導(dǎo)劑，同樣根據(jù)遞增量原則，其中槲皮素的初始添加量為飼料量的0.2％，

3、蘆丁為0.3％，茶多酚為0.04％，添加到飼料中的量按照2倍量遞增，進行20天試驗。同時設(shè)置誘導(dǎo)劑和毒素共同作用組，來研究Ⅱ相關(guān)鍵解毒酶介導(dǎo)的對蝦中常見真菌毒素危害控制效應(yīng)。
　　主要從以下幾方面考察真菌毒素導(dǎo)致的危害，比較誘導(dǎo)前后的危害變化，進而探明誘導(dǎo)對蝦中常見真菌毒素危害的內(nèi)源酶控制性技術(shù)。
　　首先，從對蝦生理特性的角度（存活率、增重率和攝食率等）考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn):四種毒素（T-2、AFB1、DON和OTA）均能導(dǎo)致對

4、蝦存活率降低，增重率、特定增長率和攝食率下降。在本研究的染毒劑量下，AFB1染毒對蝦組的存活率最低，增重率和特定增長率最慢，攝食率也最小。
　　通過20天劑量遞增染毒，T-2和DON毒素蓄積系數(shù)分別為4.26和3.76，屬于中等蓄積;KAFB1為2.24，明顯蓄積，且通過LC-MS/MS在T-2、AFB1、DON和OTA染毒對蝦體內(nèi)檢測到毒素殘留，表明T-2、AFB1、DON和OTA毒素在對蝦體內(nèi)不僅存在物質(zhì)蓄積，還有功能蓄積。<

5、br>　　其次，從病理組織學(xué)角度考察，結(jié)果表明:飼喂對蝦，從對蝦的肌肉、肝胰腺和腸道組織顯微結(jié)構(gòu)可以看出，四種毒素染毒對蝦，隨著累積染毒劑量的加大，病理損傷越嚴重，具有劑量依賴性。主要表現(xiàn)在肌肉肌纖維受損、肌節(jié)分離、肌間隙變大甚至斷裂，最嚴重時出現(xiàn)溶融現(xiàn)象;肝胰腺基底膜脫落，細胞結(jié)構(gòu)緊密性被破壞，肝小體受損，細胞溶解和細胞核消失;腸道主要是上皮黏膜褶皺變少，隨著染毒的進行腸道壁可見炎癥，嚴重時腸管組織分離，結(jié)構(gòu)疏松，肌層變薄，呈現(xiàn)溶解狀

6、態(tài)。
　　第三，從Ⅱ相關(guān)鍵酶入手，通過真菌毒素和誘導(dǎo)劑分別單獨對對蝦體內(nèi)關(guān)鍵Ⅱ相關(guān)鍵酶的活力進行測定測定，結(jié)果表明，四種真菌毒素主要抑制對蝦體內(nèi)SULT和AANAT酶活，T-2毒素抑制遞增染毒對蝦肌肉中GSTs酶活表達，但在低劑量下(0.5mg/kg)能夠激活20天蓄積染毒對蝦肌肉中的GSTs基因表達;相反誘導(dǎo)劑對SULT和AANAT酶活的誘導(dǎo)效應(yīng)大于GSTs、UGT和MT酶。之后通過誘導(dǎo)劑和毒素共同作用，發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)劑能夠誘導(dǎo)染毒對

7、蝦體內(nèi)SULT和AANAT酶活升高。
　　最后，采用統(tǒng)計學(xué)分析，通過對誘導(dǎo)劑和毒素共同作用對蝦生長指標的測定，對比單獨毒素作用對蝦的生長指標，發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)劑能夠減低毒素對對蝦的生長危害，且能減少對蝦體內(nèi)毒素殘留量，對染毒對蝦的病理組織有一定的修復(fù)作用。不同誘導(dǎo)劑激活對蝦不同部位的不同酶。
　　結(jié)論，(1)四種毒素均能導(dǎo)致對蝦存活率降低，增重率、特定增長率和攝食率下降，其中AFB1毒素的作用強度最大;四種毒素均能導(dǎo)致對蝦肌肉、肝胰

8、腺和腸道不同程度的受損，隨著累積染毒劑量的增加，肌間隙越來越大，片狀化逐漸加重，細胞核消失，到后期甚至出現(xiàn)溶融狀態(tài);肝胰腺肝小體結(jié)構(gòu)受損，細胞溶解，細胞核消失;腸道壁可見炎癥，嚴重時腸管組織分離。(2)對蝦組織中存在毒素殘留，其中在對蝦肌肉、蝦頭和血液中含量最多，T-2和DON毒素對對蝦的累積染毒蓄積為中等蓄積，AFB1為明顯蓄積，而20天染毒試驗結(jié)束時，OTA組對蝦死亡未超過一半，蓄積作用不明顯。(3)真菌毒素對對蝦體內(nèi)SULT和AA