PES1的SUMO化修飾及其相關(guān)功能的研究.pdf

1、Pescadillo(PES1)在生物體的生命活動過程中發(fā)揮重要作用，并且在多種生物中具有高度保守性。PES1是維持酵母正常生長所必須的;在哺乳動物中，PES1與上游因子（Upstream binding factor1，UBF1）核糖體的生物合成過程中發(fā)揮協(xié)同作用;小鼠實驗表明，PES1在一些細胞分裂增殖旺盛的組織中高表達，說明其可能在細胞的增殖及細胞周期中發(fā)揮了作用。此外，PES1在多種癌細胞中也是高表達的（如乳腺癌、胃癌和前列腺癌

2、等），表明PES1可能在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中也發(fā)揮了重要的作用。
　　SUMO(Small ubiquition related modifier)化修飾是一種重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾方式，具有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的細胞定位、穩(wěn)定性及活性等功能。序列分析表明，PES1含有兩個潛在的SUMO化位點。因此，本文的研究重點是確定PES1的SUMO化修飾，并進一步研究SUMO化修飾對PES1功能的影響，主要內(nèi)容包括:
　　(1)在COS-7細胞

3、中轉(zhuǎn)染外源的PES1及SUMO，并通過免疫印跡和免疫共沉淀實驗來驗證PES1是否能發(fā)生SUMO化修飾，結(jié)果表明PES1可以發(fā)生SUMO化修飾，并且SUMO1、2、3都能發(fā)揮作用，其中SUMO1的作用最強。
　　(2)確定PES1的SUMO化位點，先對PES1的序列進行軟件分析，發(fā)現(xiàn)存在兩個潛在的SUMO化位點，分別為249位和517位的賴氨酸。然后將其突變，再通過免疫印跡實驗檢測對SUMO化條帶是否產(chǎn)生影響，發(fā)現(xiàn)當517位賴氨酸突

4、變后會使條帶明顯減弱，說明517位的賴氨酸是PES1主要的SUMO化位點。
　　(3) SUMO化修飾通常會影響蛋白在細胞內(nèi)的定位及穩(wěn)定性，通過免疫熒光實驗及半衰期實驗來驗證SUMO化修飾對PES1這兩方面的影響，發(fā)現(xiàn)SUMO化修飾不影響PES1的細胞定位但SUMO化位點突變后會降低PES1的穩(wěn)定性。
　　(4)對SUMO化修飾調(diào)控PES1的功能進行研究，利用的是熒光素酶報告基因?qū)嶒灪蚆TT實驗，發(fā)先PES1的SUMO化能增