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文檔簡介
1、摘要目的:探討炎癥因子白介素1B(Interleukin一1B,IL一1B)在真菌性角膜炎中的表達及其分子調(diào)控機制。方法:采用基質(zhì)內(nèi)注射法建立小鼠真菌性角膜炎模型,以此作為大體水平的研究對象;獲取小鼠骨髓中性粒細胞,以此作為細胞水平的研究對象。實驗分為四部分:(1)建立C57BL/6小鼠真菌性角膜炎模型,采用流式細胞術(shù)和激光共聚焦顯微鏡觀察IL一1B在角膜組織的表達,探索真菌性角膜炎時IL一1B的主要細胞來源;(2)獲取C57BL/6、
2、TLR4/以及TRIF//Jx鼠中性粒細胞,與煙曲霉菌株共同培養(yǎng),采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)和Western—blot法檢測工L一1p的表達,探索真菌性角膜炎時經(jīng)典Signal1通路對IL—lD的調(diào)控作用;(3)建立C57BL/6、NLRP3/、ASC/以及Caspase一1/一小鼠真菌性角膜炎模型,獲取C57BL/6、Dectin一卜/一、NLRP3一/一、ASC一/一以及Caspase一卜/一小鼠中性粒細胞,與煙曲霉菌共同培
3、養(yǎng),采用ELISA和Western—blot法檢測IL—lB的表達,探索真菌性角膜炎時經(jīng)典Signal2通路對工L—lB的調(diào)控作用;(4)建立C57BL/6、Caspase一1一/一小鼠真菌性角膜炎模型,獲取C57BL/6、TLR4一/一、TRIF一/一、Dectinl/以及Caspase一1一/一小鼠中性粒細胞,與煙曲霉菌共同培養(yǎng),采用Western—blot法檢測IL一1B、Caspase一1l和Caspase—l的表達,探索真菌性
4、角膜炎時Caspase11對工L—lB的調(diào)控作用。結(jié)果:(1)C57BL/6小鼠感染煙曲霉菌24h后,可見大量募集至角膜感染區(qū)域的中性粒細胞;所有能夠表達IL一1B的細胞中,922%的是中性粒細胞;中性粒細胞中能夠表達IL—lB的比例為854%。感染煙曲霉菌48h后,角膜區(qū)域出現(xiàn)較高比例的巨噬細胞;所有能夠表達工L一1B的細胞中,297%的是巨噬細胞;巨噬細胞中能夠表達IL一1B的比例為966%。(2)Signal1通路預激活后給予真菌
5、刺激,C57BL/6小鼠中性粒細胞中pro—IL一1B的表達量明顯增加,未預激活而只單純給予真菌刺激,pro—IL1B的表達量也明顯增加,但與有預激相比其增加幅度略少;TLR4一/一或TRIF/d、鼠的中性粒細胞被真菌刺激4h或18h后,pro—IL一1B的表達較未感染時明顯增多,但是與C57BL/6小鼠相比無明顯差異。(3)Deetin一卜/一小鼠或者給予sky阻斷劑的C57BL/6小鼠的中性粒細胞被真菌刺激Abstractobjec
6、tiveToinvestigatetheexpressionandmolecularmechanismsofinflammatorycytokineIL一1pinfungalkeratitisMethodsMousemodeloffungalkeratitisestablishedbyreleaseAspergillusfumigatussporesintothecornealstromawithinjectionisusedforin
7、vivoexperimentsBonemarrowcellsisolatedfrommiceareusedforinvitroexperiments(1)ToinvestigatetheexpressionofIL113inthefungalkeratitismodelofC57BL/6micewithflowcytometryandconfocalmicroscopeandtoexplorethemajorcellularsource
8、ofIL1Binfungalkeratitis(2)ToinvestigatetheexpressionofIL1BintheneutrophilsofC57BL/6,TLR4/andTRIF一/一micetreatedwithAspergillusfumigatusbyELISAandWestern—blotandtoexploretheregulationforIL1pbytheclassicSignal1pathwayinfung
9、alkeratitis(3)ToinvestigatetheexpressionofIL1pinthefungalkeratitismodelofC57BL/6,NLRP3/,ASC一/一andCaspase1/一miceandintheneutrophilsofC57BL/6,Dectin一1一/一,NLRP3一/一,ASC一/一andCaspase一1一/一micetreatedwithAspergillusfumigatusbyE
10、LISAandWestern—blotandtoexploretheregulationforIL一1BbytheclassicSignal2pathwayinfungalkeratitis(4)ToinvestigatetheexpressionofIL—lp,Caspase一11andCaspase一1inthefungalkeratitismodelofC57BL/6andCaspase1/miceandintheneutroph
11、ilsofC57BL/6,Dectin1/一,TLR4/,TRIF/andCaspase一1/micetreatedwithAspergillusfumigatusbyWestemblotandtoexploretheregulationforIL一1BbyCaspase11infungalkeratitisResults(1)Thereisapronouncedneutrophilinfiltrationtothecornealstr
12、omaofmousefungalkeratitismodelin24h922%cellsincomeaoffungalkeratitiswhichcanexpressIL1pareneutrophilsand854%neutrophilsCanexpressIL一1pTherearemanymacrophagesrecruitmenttothecornealstromain48h297%cellsincorneawhichCanexpr
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