菲立磁標記大鼠骨髓基質(zhì)干細胞及對其生物活性的影響.pdf

1、本課題擬將Feridex標記體外培育的大鼠BMSCs，應用透射電鏡觀察標記后細胞的微觀形態(tài)，應用Prussian blue染色檢測Feridex標記效果和標記效率，MTT法檢測標記后大鼠BMSCs增殖水平，探討Feridex標記對大鼠BMSCs增殖水平的影響。通過聯(lián)合誘導法誘導標記后細胞向肝細胞分化，應用RT-PCR技術(shù)檢測誘導后細胞表達肝細胞ALB和AFP基因的水平，探討Feridex標記對大鼠BMSCs向肝細胞分化能力的影響。

2、 目的: 比較不同濃度Feridex標記大鼠BMSCs的標記效果以及標記后BMSCs增殖及向肝細胞分化能力，探討Feridex標記大鼠BMSCs對其生物活性的影響，尋找不影響B(tài)MSCs增殖及向肝細胞分化能力的最適標記濃度，為下一步同種異體移植磁標記BMSCs的體內(nèi)示蹤研究實驗提供理論依據(jù)。 材料與方法: 1、實驗材料來源本實驗所使用的BMSCs由5～6周齡SPF級雄性SD大鼠骨髓中提取(120～150g，購于中

3、山大學試驗動物中心)。主要試劑：Percoll單核細胞分離液、Feridex、MTT、亞鐵氰化鉀(K3Fe(CN)6)、總RNA提取試劑異硫氰酸胍(TrizOL)、RT-PCR試劑盒(FSK-100)等。主要設(shè)備：HERAEUS超凈臺、CO2恒溫孵育箱、OlympusCK2型相差顯微鏡、H7500型透射電鏡、SPECTRA-II型酶標儀、PCR擴增儀、電泳槽、電泳儀。 2、實驗方法: 3、統(tǒng)計學分析：所有數(shù)據(jù)采用SPSS

4、11.5軟件進行統(tǒng)計分析。不同濃度組不同時間點BMSCs細胞增殖水平的比較用重復測量方差分析，若P<0.05組間差異有統(tǒng)計學意義時，各時間點不同濃度組BMSCs細胞增殖水平的比較用完全隨機資料方差分析(One-way ANOVA)，若P<0.05組間差異有統(tǒng)計學意義時，則進一步行LSD多重比較。不同濃度組標記率的比較用R×C表的χ2檢驗，若組間差異有統(tǒng)計學意義時，則進一步選用四格表資料的χ2檢驗行兩兩比較。 結(jié)論: 1、

5、Friedex標記濃度為5.6μg/ml，8.4μg/ml，11.2μg/ml，14μg/ml時，雖不影響B(tài)MSCs生物活性，但標記效率較低；Friedex標記濃度為19.6μg/ml，22.4μg/ml時標記效率較高，但可嚴重影響B(tài)MSCs生長，致其死亡。 2、當Friedex標記濃度為16.8μg/ml時，F(xiàn)eridex對BMSCs標記效率較高，并且不影響B(tài)MSCs存活、增殖及向肝細胞分化的能力，標記后的BMSCs可用于進一