錳對Sertoli細胞的體外毒性研究.pdf

1、目的：研究錳對體外培養(yǎng)Sertoli細胞的影響，探討錳引起雄性生殖危害的作用機制。 方法：健康雄性20天齡SD大鼠睪丸，分離純化Sertoli細胞并鑒定。培養(yǎng)第六天分別給以1，10，50，100，200μmol/L的MnCl2染毒，對照組給以同體積的DMEM培養(yǎng)液，24小時收集細胞。100μmol/L的MnCl2劑量組染毒細胞，分別于染毒第0h，6h，24h，48h收集細胞。采用實時熒光定量PCR（Real-time PCR）檢

2、測Sertoli細胞的苗勒管抑制物（MIS）、雄激素結合蛋白（ABP）和卵泡刺激素受體（FSHR）的mRNA表達。細胞染Mn24h后，用ELISA檢測FSHR蛋白表達情況。 結果：與對照組比較，隨著染毒劑量的增加（1，10μmol/L）ABP的mRNA表達先增加（P<0.01），但隨著劑量繼續(xù)增加（50，100，200μmol/L）ABP的mRNA表達降低（P<0.01），與10μmol/L濃度組比較，隨著劑量增加（50，100

3、，200μmol/L）ABP的mRNA表達降低，差異有顯著性意義（P<0.01）；FSHRmRNA表達結果和上清液中FSHR蛋白質檢測結果具有與ABP同樣的趨勢。與對照組比，MIS mRNA表達在各劑量組間均無顯著性差異（P>0.05）。隨著染毒時間增加，與對照組比較，ABP的mRNA表達先增加（6h）（P<0.05），但隨著時間繼續(xù)增加（24h，48h），ABP的mRNA表達降低（P<0.05）； FSHR的mRNA表達在染毒初期（6