醋酸鉛對(duì)體外培養(yǎng)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞的毒性作用及凋亡機(jī)理的研究.pdf

1、隨著環(huán)境鉛污染和職業(yè)鉛暴露的日趨嚴(yán)重，鉛對(duì)人類和動(dòng)物的生殖毒性倍受關(guān)注，但鉛的生殖毒性機(jī)制還不很清楚。睪丸間質(zhì)細(xì)胞作為生精細(xì)胞的支架，可為生精細(xì)胞提供必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，能合成與分泌雄激素結(jié)合蛋白為生精細(xì)胞提供高濃度的雄激素環(huán)境，并具備一定的吞噬功能等，是體內(nèi)一種非常重要的雄性生殖細(xì)胞。因此，在本研究中，選用小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞（TM3細(xì)胞）為研究對(duì)象，探討鉛對(duì)雄性動(dòng)物生殖細(xì)胞的損傷作用及機(jī)制，為進(jìn)一步研究開發(fā)新型鉛特效解毒藥提供試驗(yàn)基礎(chǔ)和理論

2、依據(jù)，并為防治由重金屬引發(fā)的畜禽繁殖機(jī)能障礙提供新的切入點(diǎn)。
　　研究目的:以體外培養(yǎng)TM3細(xì)胞為模型，觀察堿式醋酸鉛對(duì)其凋亡的影響，進(jìn)而探索凋亡死亡受體途徑的機(jī)制。
　　研究方法:體外培養(yǎng)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞，胰酶消化傳代后，待細(xì)胞密度達(dá)到80％，將細(xì)胞分為四組，分別加入0，2，10，50μmol/L的醋酸鉛染毒TM3細(xì)胞，作用24 h后，采用MTT法檢測(cè)醋酸鉛對(duì)細(xì)胞增殖的影響;用氮藍(lán)四唑(NBT)顯色法檢測(cè)SOD活性變化，用

3、硫代巴比妥酸法測(cè)定細(xì)胞中MDA的含量，間接法檢測(cè)細(xì)胞中GSH-Px活力，ABTS法檢測(cè)總抗氧化能力即T-AOC; Hoechest33258和Annexin-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡;Westernblot檢測(cè)Caspase-8，F(xiàn)AS，F(xiàn)AS1蛋白含量，以及Caspase-8阻斷劑對(duì)細(xì)胞凋亡的抑制作用。
　　結(jié)果:TM3細(xì)胞在36℃、5％ CO2環(huán)境下生長(zhǎng)良好，12-36 h為細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。醋酸鉛抑制TM3細(xì)胞增殖;試

4、驗(yàn)所選濃度2，10，50μM醋酸鉛均顯著降低抗氧化酶SOD、GSH-Px活性以及總抗氧化能力T-AOC，升高M(jìn)DA的含量從而引起細(xì)胞氧化損傷;研究表明醋酸鉛誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，最高細(xì)胞凋亡率可達(dá)33.87％，且通過(guò)死亡受體途徑的FAS/FAS-L途徑誘導(dǎo)TM3細(xì)胞凋亡。主要表現(xiàn)為:醋酸鉛組的FAS，F(xiàn)AS-L，Caspase-8蛋白含量與對(duì)照組相比顯著增多，以及Caspase-8抑制劑(C21H34N4O10)顯著抑制醋酸鉛所誘導(dǎo)的TM3細(xì)胞