53BP1介導(dǎo)的DNA損傷應(yīng)答通路異常與前列腺癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系研究.pdf

1、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文1引言引言在全球范圍內(nèi)，前列腺癌的發(fā)病率居所有惡性腫瘤第5位和男性惡性腫瘤第2位。在美國，前列腺癌已成為最常見的惡性腫瘤之一，居男性癌癥致死的第二位，每年有300000例新發(fā)現(xiàn)前列腺癌，并有40000患者死于前列腺癌[9]。目前我國的前列腺癌發(fā)生率約為美國的110，但是隨著人口老齡化、生活方式的西化及檢測(cè)手段的進(jìn)步，前列腺癌的發(fā)生呈上升趨勢(shì)。因此，從分子水平研究前列腺癌的發(fā)病機(jī)制和診斷，對(duì)前列腺癌的防治有重

2、大意義。關(guān)于前列腺癌發(fā)生、發(fā)展的具體機(jī)制目前大多數(shù)還不是很清楚。已知與前列腺癌發(fā)生的相關(guān)因素包括年齡、種族、內(nèi)分泌、家族等多方面[10]。少數(shù)遺傳易感基因的突變被報(bào)道與家族性前列腺癌的發(fā)生有關(guān)[11]。然而，更多的證據(jù)和觀點(diǎn)認(rèn)為多種基因缺陷的疊加效應(yīng)導(dǎo)致了該腫瘤的發(fā)生，尤其是散發(fā)性前列腺癌[12]。因此，研究與前列腺癌發(fā)生相關(guān)的基因功能缺陷，不僅可以幫助了解前列腺癌發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)理、篩選出與前列腺癌進(jìn)展及判斷預(yù)后相關(guān)的分子指標(biāo)，并且

3、可以為分子靶向的前列腺癌治療提供科學(xué)依據(jù)?；蚪M不穩(wěn)定性（GenomicinstabilityGNI）是包括前列腺癌在內(nèi)的多種人類腫瘤發(fā)生的常見特征[13]。在受到各種DNA損傷因素作用時(shí)，雙鏈DNA發(fā)生斷裂。如果損傷沒有正確修復(fù)，則可導(dǎo)致基因的丟失或重排，其結(jié)果是導(dǎo)致細(xì)胞死亡或細(xì)胞轉(zhuǎn)化及腫瘤發(fā)生[14]。DNA損傷應(yīng)答通路(DNAdamageresponsepathwayDDR)對(duì)于啟動(dòng)損傷DNA的修復(fù)和維持人類基因組的穩(wěn)定性起到了關(guān)

4、鍵的作用。目前已知DNA損傷反應(yīng)通路重要成員的基因突變導(dǎo)致的功能破壞或缺失參與了人類多種腫瘤的發(fā)生[15]。DDR通路中關(guān)鍵因素的功能缺失（P53CHEK2，BRCA1，BRCA2等）均參與了前列腺癌的發(fā)生。另有研究表明，DNA損傷反應(yīng)途徑可以防止前列腺上皮的腫瘤性轉(zhuǎn)化，在具有基因組不穩(wěn)定性的轉(zhuǎn)基因小鼠實(shí)驗(yàn)中也出現(xiàn)了與人類前列腺癌相同的表型。這些證據(jù)表明，由DDR通路關(guān)鍵基因突變或缺失導(dǎo)致的基因組不穩(wěn)定可能是前列腺癌發(fā)生過程中的一個(gè)早期

5、事件。另外，在人類大腸癌、胃癌及乳腺癌等腫瘤中，P53基因突變率達(dá)到上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文3第一部分第一部分53BP1蛋白表達(dá)變化在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用蛋白表達(dá)變化在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用1.實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料1.1研究對(duì)象研究對(duì)象50例前列腺腺癌標(biāo)本取自上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院病理科2007～2009年存檔的前列腺腺癌根治標(biāo)本，每例均采用抗體雞尾酒p504sp63標(biāo)記，經(jīng)2名病理醫(yī)師確診。患者年齡53～79歲，中位年齡

6、68.5歲，術(shù)前血清PSA值4.4～62.7ngml平均值17.4ngml，均未接受去勢(shì)治療或放化療。50例前列腺腺癌均采用Gleason評(píng)分，其中Gleason評(píng)分5～6分（中分化）11例，7～10分（低分化）39例。根據(jù)WHOTNM分期，I期II期（T1、T2期）34例，III期IV期（T3、T4期）16例。50例前列腺腺癌中有神經(jīng)浸潤30例，腺外浸潤9例。選取此50例前列腺腺癌標(biāo)本的癌旁良性前列腺組織，以及上海交通大學(xué)附屬第六人民

7、醫(yī)院病理科2008～2009年間前列腺穿刺標(biāo)本病理診斷為高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變（HGPIN）20例、良性前列腺增生（BPH）電切標(biāo)本20例作為對(duì)照（圖1～4）。1.2主要試劑主要試劑①兔抗人53BP1多克隆抗體（CellSignalingTechnology公司，#4937）②DakoREALTMEnvisionTM檢測(cè)試劑盒，HRPDAB，兔鼠通用：ADakoREALTMEnvisionTMHRP兔鼠100mL即用BDakoREALTMSu