MiR-152與前列腺癌發(fā)生發(fā)展關系研究及非諾貝特對前列腺癌干預機制研究.pdf

1、第一部分:miR-152對前列腺癌細胞株遷移和侵襲能力影響的實驗研究
　　目的:微小RNA（microRNA）是一類18～25核苷酸序列的調(diào)控性RNA，已被證實在多種惡性腫瘤中異常表達并發(fā)揮重要調(diào)控作用。microRNA-152(miR-152)在多種腫瘤，如乳腺癌、結直腸癌、子宮內(nèi)膜癌中異常表達。前列腺癌中miR-152也被發(fā)現(xiàn)表達下調(diào)，但其對前列腺癌的影響極其調(diào)控機制尚未完全明確。本研究擬研究miR-152在前列腺癌及其前列腺

2、正常組織中的表達情況及其對前列腺癌細胞功能的影響。
　　材料和方法:采用TaqMan熒光定量RT-PCR方法檢測8例前列腺癌和8例前列腺正常組織的樣本以及正常前列腺細胞和前列腺癌細胞系中miR-152的表達水平。體外實驗中利用miR-152 mimics上調(diào)miR-152的表達，RT-PCR檢測轉染效率;流式細胞儀檢測上調(diào)miR-152后，PC-3和DU145細胞凋亡及細胞周期的改變;Transwell細胞遷移實驗及侵襲實驗評估m(xù)

3、iR-152對前列腺細胞系PC-3和DU145細胞遷移和侵襲能力的影響。
　　結果:與正常前列腺組織相比，miR-152在前列腺癌組織及前列腺癌細胞中的表達水平顯著下調(diào)(P＜0.05)。利用細胞轉染技術瞬時轉染miR-152 mimics后，能夠顯著升高miR-152的表達，miR-152的表達上調(diào)又可以顯著降低前列腺癌細胞的遷移(P＜0.05)和侵襲能力（P＜0.05），但并沒有對前列腺癌細胞的凋亡(P＞0.05)、細胞周期（P

4、＞0.05）及細胞增殖活性（P＞0.05）產(chǎn)生影響。
　　結論:miR-152在前列腺癌中顯著下調(diào)，上調(diào)miRNA-152可影響前列腺癌細胞的遷移和侵襲能力，其可能作為一種腫瘤抑制因子參與前列腺癌的侵襲和轉移。
　　第二部分:非諾貝特下調(diào)前列腺癌細胞LNCaP中雄激素受體及該受體靶基因的表達并誘導氧化應激
　　目的:非諾貝特，一類過氧化物酶體增殖物激活受體α激動劑，被廣泛應用于治療高脂血癥和高膽固醇血癥的治療。近些年研

5、究報道非諾貝特具有抗增殖和促凋亡的抗腫瘤效應。本研究旨在探索非諾貝特對于前列腺癌細胞LNCaP的影響，研究其在前列腺癌進展過程中可能參與的機制。
　　材料和方法:采用流式細胞術檢測非諾貝特對LNCaP細胞周期和凋亡的影響。利用Westem Blot技術檢測BCL-2、CCND1、E2F1、BAX、雄激素受體以及雄激素受體靶基因蛋白表達水平的變化情況以及Akt通路磷酸化的改變情況。實時熒光定量PCR(RT-PCR)方法檢測非諾貝特對

6、細胞雄激素受體以及雄激素受體靶基因mRNA水平的影響。ELISA法檢測不同時間點不同濃度非諾貝特對細胞分泌PSA的改變情況。雙熒光素酶報告基因檢測不同濃度非諾貝特對雄激素受體啟動子活性的改變水平。DCFH-DA和流式細胞術用于檢測細胞內(nèi)活性氧，T-AOC，SOD和MDA的表達情況。
　　結果:非諾貝特能夠使得前列腺癌細胞LNCaP發(fā)生G1期阻滯并且誘導細胞凋亡，下調(diào)雄激素受體(AR)和雄激素受體靶基因（PSA和TMPRSS2）的表