Hsc70下調劑-N-取代苦參酸類似物的設計、合成及抗HCV-HBV活性研究.pdf

1、我國傳統(tǒng)中藥單體苦參素（OMT，圖1）由于其良好的治療慢性乙型病毒性肝炎(HBV)療效，已在我國臨床運用多年，其安全性也得到普遍認可，但其抗HBV作用機制一直未見報道。我研究所蔣建東教授等以OMT為分子探針，首次發(fā)現(xiàn)并闡明了其抗HBV的作用機制(AAC，2010)：OMT通過下調肝細胞熱應激同源蛋白70(Hsc70)的基因表達而達到抑制HBV復制的作用；同時還以OMT的類似物為探針，闡明了Hsc70也是抗丙型肝炎病毒(HCV)的靶點(H

2、epatology，2010)，該類似物能使Hsc70mRNA失穩(wěn)而下調肝細胞Hsc70蛋白的表達，明顯抑制HCVRNA的復制進而發(fā)揮抗病毒作用。因此，以Hsc70為靶點的抗病毒化合物應具有抗HBV/HCV的活性、以及安全性高的特點。
　　 本論文在上述工作基礎上以OMT為先導物，針對分子中的1-位N原子、5-位手性碳原子構型、D環(huán)開環(huán)后裸露的羧基及12-位N原子上的側鏈進行較為系統(tǒng)的結構修飾與優(yōu)化，累積設計合成了89個N-取代

3、苦參酸類似物（其中85個為未見文獻報道），并通過下調Hsc70活性、抗HBV或者抗HCV活性評價，闡明了此類化合物的構效關系(SAR),勾畫出構效關系總圖?？偨YSAR結果如下：
　　 1)1-位N上的氧原子對活性無顯著影響，不是活性必需；
　　 2)D環(huán)開環(huán)后所得苦參酸仍保留活性，提示D環(huán)不是活性必需；
　　 3)苦參酸的羧基為活性必需基團，當羧基成酯或被還原成醇后活性下降；
　　 4)12-位引入合適的

4、取代芐基，特別芐基苯環(huán)上引入吸電子取代基可能使化合物抗HBV/HCV活性增加；當12-芐基苯環(huán)被合適的雜環(huán)特別是4-吡啶環(huán)替換時，活性大大優(yōu)于先導物；芐基的CH2為活性必需基團，當其結構發(fā)生改變時化合物抗HBV/HCV活性下降或消失；
　　 5)母核5-位C原子的S構型為活性必需，當其變?yōu)镽構型時化合物抗HCV病毒活性下降，細胞毒性增加。
　　 所合成的89個化合物中，有51個類似物具有普遍的抗HBV/HCV活性，其中1

5、4個具有較好的活性；8個化合物（6b、6f、6h、6i、6n、6p、6s和14b）顯示出較高的治療指數(shù)，其抗HBV/HCV活性明顯優(yōu)于先導物OMT。
　　 急毒實驗表明，小鼠體內(nèi)一次性腹腔注射給予各化合物時，化合物6f、6h和6i顯示出一定的毒性，而其余5個化合物（6b、6n、6p、6s和14b）的LD50＞1000mg/kg，具有很好的體內(nèi)安全性。小鼠體內(nèi)初步藥代實驗表明5個活性化合物6b、6n、6p、6s和14b均具有很好的

6、藥代動力學性質：其達峰時間(Tmax)均為0.25-0.5h，藥時曲線下面積(AUC0-t)＞9000ng·h/mL，半衰期(t1/2)為1-2h，且口服生物利用度均＞70％。但計算機軟件（ADMETPredictor，SimulationsPlus公司）的ADME/T預測表明6n和6p具有潛在的致癌性和生殖毒性。因此選擇化合物6b、6s和14b進行下一步研究。
　　 對活性化合物6b進行的鴨乙肝病毒實驗(DHBV)表明其具有良

7、好的體內(nèi)抗HBV活性，給藥劑量為75mg/kg/d時，能使鴨血清乙肝病毒DNA水平下降58%，與拉米夫定(50mg/kg/d，69%)相當。
　　 對6b和6s的體外Hsc70下調活性研究表明，N-取代苦參酸類似物確是通過下調宿主Hsc70的表達而發(fā)揮抗病毒作用的。因此所得候選物6b、6s和14b與核苷類抗病毒藥物相比，具有廣譜(HBV/HCV)和不易誘導耐藥的特點。其中化合物6b和14b作為抗HCV候選物已完成企業(yè)轉讓，進入臨