人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞FPR表達(dá)與功能檢測(cè)及其治療學(xué)意義.pdf

1、既往有關(guān)趨化因子受體(chemokine receptor)功能的研究主要集中在其介導(dǎo)炎癥過(guò)程中的作用，近些年的研究已發(fā)現(xiàn)在惡性腫瘤中存在多種趨化因子，瘤細(xì)胞也表達(dá)相應(yīng)趨化因子受體，它們對(duì)腫瘤的發(fā)展和演進(jìn)起著重要而復(fù)雜的作用。新近本課題研究小組發(fā)現(xiàn)，7次跨膜G-蛋白耦聯(lián)受體超家族成員甲?；氖荏w(formylpeptide receptor，F(xiàn)PR)在高度惡性的膠質(zhì)瘤組織中呈選擇性表達(dá)，且與膠質(zhì)瘤的惡性級(jí)別和微血管密度有關(guān)；在其配體fM

2、LF刺激受體活化后，瘤細(xì)胞趨化作用增強(qiáng)，細(xì)胞內(nèi)Ca<'2+>動(dòng)員增加；另外，利用小RNA干擾技術(shù)(smallinterference RNA，siRNA)抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87-MG的FPR表達(dá)，瘤細(xì)胞增殖速度減緩，促血管生成因子VEGF等分泌減少；這些結(jié)果提示惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的功能性FPR可能具有更為重要和廣泛的生物學(xué)作用，并有望成為一種新的治療膠質(zhì)瘤的分子生物學(xué)靶點(diǎn)。膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最為常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，以快速生長(zhǎng)、高度侵襲以

3、及豐富的血管化和壞死病灶為主要特征，惡性膠質(zhì)瘤所表達(dá)的FPR在這些生物學(xué)行為方面的作用值得深入研究和探討，尤其是其治療學(xué)意義。我們以往有關(guān)膠質(zhì)瘤FPR表達(dá)與功能的研究所使用的材料是細(xì)胞系和腫瘤組織，膠質(zhì)瘤原代細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中是否維持功能性FPR表達(dá)尚不清楚。 諾帝(Nordy)是本課題研究組基于天然產(chǎn)物去甲二氫愈創(chuàng)木酸(nordihydroguaiaretic acid，NDGA)的化學(xué)結(jié)構(gòu)和效應(yīng)，自行研制開(kāi)發(fā)的新型抗癌候選藥物

4、。初步的實(shí)驗(yàn)觀察顯示諾帝可抑制包括人惡性膠質(zhì)瘤在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞的體外生長(zhǎng)增殖，對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系SHG-44和CHG-5細(xì)胞裸鼠移植瘤有明顯的抑制生長(zhǎng)效應(yīng)，并且，諾帝還具有抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞趨化因子受體CXCR4和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)的作用。但諾帝的抗腫瘤作用機(jī)制是否與抑制FPR功能性表達(dá)有關(guān)，尚需進(jìn)一步研究和明確。為進(jìn)一步深入了解惡性膠質(zhì)瘤中FPR表達(dá)及其功能意義，以及諾帝的抗腫瘤作用及其機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)以人膠質(zhì)瘤原代及短期傳代培養(yǎng)

5、細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料，主要觀察了膠質(zhì)瘤培養(yǎng)細(xì)胞FPR的表達(dá)、其配體激活受體后瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和血管生成因子產(chǎn)生的變化，以及諾帝對(duì)FPR表達(dá)及其功能的影響。主要研究結(jié)果和結(jié)論如下： 1．體外原代及短期傳代培養(yǎng)細(xì)胞由于能在一段時(shí)間內(nèi)保持體內(nèi)細(xì)胞的生長(zhǎng)特性及功能狀況，為了便于研究人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞FPR表達(dá)及功能學(xué)意義，我們首先進(jìn)行了人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞的原代培養(yǎng)，分別用組織塊培養(yǎng)法和胰酶消化法對(duì)手術(shù)切除的新鮮膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)，共培養(yǎng)成功9例，并

6、分別對(duì)其進(jìn)行了初步鑒定。 2．采用間接免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)合激光共聚焦顯微掃描技術(shù)檢測(cè)了人膠質(zhì)瘤原代及短期傳代培養(yǎng)細(xì)胞中FPR的表達(dá)，結(jié)果顯示：在高惡性級(jí)別(WHO Ⅲ、Ⅳ級(jí))的5例膠質(zhì)瘤培養(yǎng)細(xì)胞中檢測(cè)到FPR陽(yáng)性信號(hào)，呈不連續(xù)的線性熒光表達(dá)于瘤細(xì)胞胞膜，而在培養(yǎng)成功的其它低惡性級(jí)別(WHO Ⅰ、Ⅱ級(jí))膠質(zhì)瘤細(xì)胞中未見(jiàn)FPR表達(dá)，進(jìn)一步證實(shí)FPR在人惡性膠質(zhì)瘤組織及細(xì)胞中的表達(dá)是呈選擇性的，與腫瘤的惡性級(jí)別有關(guān)。 3．

7、配體fMLF激活FPR后，培養(yǎng)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)顯著增快，且此作用隨fMLF活化時(shí)間的延長(zhǎng)而越發(fā)明顯，提示表達(dá)于惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞的FPR對(duì)其配體fMLF的刺激具有反應(yīng)性，活化后的FPR可促進(jìn)瘤細(xì)胞的體外增殖；利用ELISA技術(shù)檢測(cè)了FPR活化后對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞VEGF產(chǎn)生的誘導(dǎo)作用，結(jié)果顯示在10～1000nmol/L濃度范圍內(nèi)fMLF誘導(dǎo)的培養(yǎng)瘤細(xì)胞VEGF蛋白的分泌水平均較未刺激組明顯增加，且與fMLF的濃度呈劑量依賴性。這些結(jié)果表明膠質(zhì)瘤