ANGPTL4基因及其缺失突變體抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)理研究.pdf

1、ANGPTL4基因是本實(shí)驗(yàn)室在以細(xì)胞生長(zhǎng)為基礎(chǔ)的功能基因篩選中從人胎盤cDNA文庫中克隆出的與血管生成素(angiopoietin)相關(guān)的新基因，起初命名為ppll58，現(xiàn)已由HUGO統(tǒng)一命名為ANGPTL4(angiopoietin-like4)。并用RACE-PCR獲得其全長(zhǎng)。該基因cDNA全長(zhǎng)為1943bp，開放閱讀框含1218bp，編碼406個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)分子量為45．2kDa。Westernblot結(jié)果顯示，該基因的真核表達(dá)產(chǎn)

2、物分子量約為60kD，可能是翻譯后修飾的結(jié)果。序列分析顯示該基因N端有一疏水信號(hào)肽和卷曲(coiled-coil)結(jié)構(gòu)域，C端有一纖維蛋白原樣(fibrinogen-like)結(jié)構(gòu)域。含有一糖基化位點(diǎn)。同源比較表明ANGPTLA與Ang2在氨基酸水平上具有40％的同源性。ANGPTL4定位于染色體19p13．3。 我們構(gòu)建ANGPTL4基因全長(zhǎng)及其功能結(jié)構(gòu)域(fibronectin-likedomain,signalpeptid

3、e，coiled-coildomain)缺失突變體融合表達(dá)載體即ANGPTL4-GFP-N1、ANGPTIA-dell-GFP-N1、ANGPTL4-del2-GFP-N1、ANGPTL4-del3-GFP-N1，脂質(zhì)體法將EGFP-N1空載體及其ANGPTL4基因缺失突變體分別轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞SMMC-7721，G418篩選，建立穩(wěn)定細(xì)胞系。用穩(wěn)定細(xì)胞系進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)來研究ANGPTIA基因及缺失突變體對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721生長(zhǎng)的影

4、響。結(jié)果表明ANGPTL4基因缺失突變體體外對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721的生長(zhǎng)、集落形成具有明顯的抑制作用(均為PO．05

5、)。說明ANGPTL4基因缺失突變體對(duì)肝癌SMMC-7721細(xì)胞體內(nèi)、外生長(zhǎng)均具有明顯抑制作用，但該抑制作用不是通過促進(jìn)細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)的。 我們用脂質(zhì)體法將EGFP-N1空載體及其ANGPTIA基因缺失突變體分別轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞SMMC-7721G418篩選，建立穩(wěn)定細(xì)胞系，用穩(wěn)定細(xì)胞系進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)來研究ANGPTL4基因及缺失突變體對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721體外血管新生的影響。結(jié)果表明ANGPTL4全長(zhǎng)基因及缺失突變體ANGPT