SRC-1和Twist1蛋白表達與人乳腺癌臨床預(yù)后的關(guān)系以及誘導(dǎo)性敲除Twist1基因?qū)π∈笊砉δ苡绊懙某醪窖芯?pdf

1、乳腺癌是世界上女性患病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一。盡管如ER，PR和HER2等一些分子標記物已經(jīng)被廣泛用于對乳腺癌病理類型的分析、治療方案的選擇以及預(yù)后判斷的參考，但是，這些分子標記物對判斷患者的質(zhì)量反應(yīng)及預(yù)后仍有相當?shù)木窒扌?。所以，我們?nèi)孕枰l(fā)現(xiàn)和驗證更多可靠的分子標記物，使之能夠應(yīng)用于臨床診治和預(yù)后判斷。
　　Twist1屬于堿性螺旋-環(huán)-螺旋(basichelix-loop-helix，bHLH)轉(zhuǎn)錄因子超家族成員，它編碼

2、一種含有堿性螺旋-環(huán)-螺旋(bHLH)結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子和氨基酸基序特異蛋白參與調(diào)節(jié)器官發(fā)生的過程。Twist1最初被發(fā)現(xiàn)在果蠅的胚胎中胚層分化中發(fā)揮關(guān)鍵作用。與其調(diào)節(jié)器官發(fā)生的主要作用一致的是，生理情況下，Twist1主要在中胚層來源的組織中的表達。作為一個胚胎形態(tài)發(fā)生的主要調(diào)節(jié)因子，Twist1也被認為在腫瘤細胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、侵襲、轉(zhuǎn)移、癌細胞干性維持以及癌細胞化療耐藥等過程中起到非常重要的作用。Twist1在人乳腺癌中過表達往往與

3、腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移以及不良預(yù)后密切相關(guān)。因此Twist1被看做是乳腺癌治療的潛在靶標。
　　第一部分:SRC-1與Twist1在人乳腺癌中的表達及與臨床預(yù)后的關(guān)系
　　類固醇受體輔助活化因子1(SRC-1或NCOA1)是p160家族成員之一，其作用是在性激素存在時輔助活化ERα和PR等核受體。之前的研究表明，SRC-1不僅在動物生殖器官的發(fā)育和生長過程中起到非常重要的作用，而且在腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的多種信號通路

4、中扮演著異常重要的角色。盡管基礎(chǔ)研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在乳腺癌細胞中，SRC-1通過共激活能結(jié)合于Twist1近端啟動子的轉(zhuǎn)錄因子PEA3來激活Twist1的轉(zhuǎn)錄，但在人乳腺癌中，SRC-1與Twist1的關(guān)系以及它們與各臨床因子的關(guān)系目前仍屬未知。
　　為了解在人乳腺癌中SRC-1與Twist1蛋白表達的關(guān)系，以及探索二者在乳腺癌患者臨床預(yù)后判斷中的價值，我們將對制作成組織芯片的137例乳腺癌患者的腫瘤組織進行SRC-1和Twist1免疫

5、組化染色并評分，其中123例患者有中位時間長達5年的術(shù)后隨訪資料。我們采用Kaplan-Meier法制作了生存曲線，并采用COX比例風險回歸模型進行單因素和多因素生存分析。
　　在本研究中，我們發(fā)現(xiàn):
　　1.在人乳腺癌中SRC-1和Twist1的蛋白表達呈正相關(guān)(p=0.009)。
　　2.SRC-1的表達與HER2的呈正相關(guān)(P=0.024)。Twist1的表達與淋巴轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(p＜0.001)，與PR陽性表達呈

6、負相關(guān)(P=0.041)。
　　3.SRC-1或Twist1陽性表達患者的總生存率(OS)和無病生存率(DFS)比均陰性表達的患者明顯較差(各組p＜0.05)。另外，SRC-1和Twist1同時陽性表達的患者在四組患者中預(yù)后最差，而SRC-1和Twist1同時陰性表達的患者預(yù)后最佳(各組p＜0.01)。
　　4.COX多因素生存分析發(fā)現(xiàn)，SRC-1的表達、腫瘤分期和PR狀態(tài)是總生存率的獨立預(yù)測因子(p=0.019，＜0.00

7、1和0.020);Twist1的表達、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和PR狀態(tài)是無病生存率的獨立預(yù)測因子(p=0.006，0.001和0.029)。
　　第二部分:Twist1蛋白在成體小鼠全身組織器官中的分布及誘導(dǎo)性敲除Twist1基因?qū)π∈笊砉δ艿挠绊?br>　　由于Twist1缺失會導(dǎo)致小鼠在胚胎時期致死亡，Twist1在成年動物中的功能仍然未知。人類的Twist1等位基因突變是Saethre-Chotzen綜合征(Saethre-Cho

8、tzensyndrome，SCS，尖頭并指(趾)畸形綜合征Ⅲ型，一種常染色體顯性遺傳綜合征。臨床表現(xiàn)為短頭畸形、面部不對稱、額部發(fā)際低、眉異常、眼瞼下垂、瞼裂斜向下、眶距增寬、鼻縱隔偏曲、面中部凹陷、小耳、錯頜、并指，以及其它發(fā)育缺陷）發(fā)生的原因。針對癌癥患者，如果靶向敲除Twist1后是否會導(dǎo)致嚴重的并發(fā)癥？這是一個值得探討的問題。
　　首先，我們發(fā)現(xiàn)，Twist1蛋白在成體小鼠的乳腺成纖維細胞以及皮膚毛囊毛乳頭細胞等一些組織器

9、官中表達;隨后，我們建立了他莫西芬誘導(dǎo)性Twist1基因敲除小鼠模型以研究Twist1敲除對成體小鼠的影響。
　　我們在實驗中發(fā)現(xiàn):
　　1.在鼠齡6周時敲除雌鼠的Twist1基因?qū)ζ淙橄僭谇啻浩?、懷孕期和哺乳期的發(fā)育及其在哺乳期的泌乳功能沒有明顯影響。
　　2.盡管Twist1蛋白在皮膚毛乳頭細胞中的表達并未隨毛發(fā)生長周期而發(fā)生改變，我們在小鼠出生后第13天（此時毛囊已發(fā)育）時敲除Twist1基因，發(fā)現(xiàn)小鼠毛發(fā)的休止

10、期明顯縮短，生長期明顯延長，因而毛發(fā)生長的速度明顯加快。
　　3.Twist1敲除小鼠的生長發(fā)育以及生育功能正常。分別在雄鼠和雌鼠中敲除Twist1基因，對其體重、心率、肌肉和脂肪含量等指標均沒有明顯影響，僅在雌鼠中發(fā)現(xiàn)Twist1基因敲除使其血壓有輕度下降，但對雄鼠血壓沒有影響。
　　綜上所述，我們首次發(fā)現(xiàn)，在人乳腺癌中SRC-1的表達與Twist1的表達具有正相關(guān)，驗證了二者間存在調(diào)控關(guān)系;我們也驗證了SRC-1和Twi