丙戊酸鈉、妥泰對癲癇大鼠認(rèn)知功能的影響以及海馬神經(jīng)元凋亡和Bcl-2及Bax表達(dá)的變化.pdf

1、目的：癲癇(Epilepsy，EP)是由多種因素引起的慢性腦功能障礙綜合征，是神經(jīng)系統(tǒng)常見病。目前癲癇的治療主要依靠抗癲癇藥物。隨著對癲癇研究的不斷深入，癲癇對認(rèn)知功能的影響逐漸受到人們的重視，但其確切機制尚未闡明。在臨床上很難區(qū)分認(rèn)知功能損害是由癲癇本身引起的，還是應(yīng)用抗癲癇藥物(AEDs)所造成的，而癲癇動物模型卻可以通過控制癲癇發(fā)作的各個因素來探討癲癇對認(rèn)知功能損害的可能原因和相關(guān)機制。我們利用戊四氮(Pentetrazole，P

2、TZ)點燃的慢性癲癇大鼠模型，通過丙戊酸鈉(valproate，VPA)、妥泰(topiramate，TPM)治療使癲癇得到控制后，應(yīng)用Morris水迷宮試驗檢測大鼠經(jīng)抗癲癇藥物治療后認(rèn)知功能的差異，以評價大鼠的行為學(xué)改變，用DNA原位末端標(biāo)記法(terminaldeoxynucleotidyl transferse-mediated biotinylated deoxyuridinetriphosphate nickel end la

3、beling，TUNEL)檢測海馬區(qū)的凋亡細(xì)胞，應(yīng)用免疫組化法檢測海馬區(qū)神經(jīng)元Bax和Bcl-2的表達(dá)的變化，以研究評價抗癲癇藥物丙戊酸鈉、妥泰對癲癇大鼠認(rèn)知功能的影響。 方法： 1、分組 選用清潔級健康雄性青春期Sprague-Dawley(SD)大鼠40只(201±29)g，隨機分為4組，每組lO只。隨機選取1組作為正常對照組(NS組)，其余3組用戊四氮(PTZ)點燃，致癇后隨機選取1組作為癲癇對照組(PT

4、Z組)，另外2組(實驗組)給予丙戊酸鈉(VPA組)、妥泰(TPM組)控制癲癇發(fā)作。 2、造模正常對照組大鼠每日上午腹腔注射生理鹽水(35mg/kg)，其余3組按35mg/(kg·d)腹腔注射化學(xué)致癇劑戊四氮，直至達(dá)到足夠強度癲癇發(fā)作，約需持續(xù)2周。 3、腦電圖描記在SD大鼠完全點燃后進(jìn)行腦電圖記錄，檢驗點燃效果。將大鼠固定于腦立體定位儀上，參照電極固定于鼻部，前額、顳葉或頂葉各一支電極，地線固定于背部。 4

5、、治療 造模成功后進(jìn)行如下處理：正常對照組，繼續(xù)腹腔注射生理鹽水(35mg/kg)每日1次；PTZ組繼續(xù)按35mg/(kg·d)腹腔注射PTZ每日1次。正常對照組、PTZ組經(jīng)口腔用生理鹽水灌胃，每日2次；實驗組將溶于生理鹽水的丙戊酸鈉、妥泰每日分2次分別灌胃，每日總劑量按成人單位體重劑量的25倍計算，丙戊酸鈉約250mg/(kg·d)，妥泰約80mg/(kg ·d)。 5、行為學(xué)檢測應(yīng)用Morris水迷宮試驗檢測各組

6、大鼠經(jīng)治療后學(xué)習(xí)及記憶功能的差異。 6、海馬神經(jīng)元凋亡的檢測完成行為學(xué)檢測后，將各組大鼠在深度麻醉下用生理鹽水、4％多聚甲醛溶液經(jīng)左心室、主動脈灌注，取海馬組織，置于4％多聚甲醛溶液中后固定后制作石蠟標(biāo)本。用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧尿嘧啶核苷三磷酸缺口末端標(biāo)記技術(shù)(terminal deoxynucleotidyl transferse-mediatedbiotinylated deoxyuridine triphosp

7、hate nickel end labelingtechnique．TUNEL)檢測海馬區(qū)的凋亡細(xì)胞。 7 Bcl-2和Bax陽性細(xì)胞的檢測標(biāo)本制作方法同上，用免疫組化方法檢測Bcl-2和Bax陽性細(xì)胞。 結(jié)果： 1、造模情況 實驗組大鼠按35mg/(kg·d)腹腔注射致癇劑PTZ，持續(xù)2周，均達(dá)到足夠強度癲癇發(fā)作，造模成功。 2、腦電圖結(jié)果正常對照組表現(xiàn)為以9-11Hz α波為主，散在θ波，兩側(cè)對稱

8、，無癇樣放電。 PTZ點燃組均出現(xiàn)典型的高波幅棘一慢波、尖一慢波、棘波、尖波發(fā)放。 3、治療結(jié)果 丙戊酸鈉、妥泰治療組均能控制癲癇發(fā)作。 4、行為學(xué)檢測Morris水迷宮試驗測試結(jié)果顯示： VPA組測試成績提高很快(P<0.01)。TPM組測試成績提高慢，各次、各天之間差異無顯著性(P>0.05)，較NS組差。每天完成6次測試所用時間的比較顯示，TPM組較其他3組所用時間長(P<0.01)：

9、其他3組所用時間無顯著性差異(P>0.05)。在尋找平臺象限和在平臺象限逗留時間的測試中，TPM組尋找平臺象限時間與其他3組之間均數(shù)存在差異(P<0.01)，所需時間明顯長于其他組；逗留平臺象限時間較其他3組無顯著性差異(P>0.05)。其他3組尋找平臺象限和在平臺象限逗留的時間無顯著性差異(P>0.05)。 5、海馬神經(jīng)元凋亡的檢測結(jié)果正常對照組、PTZ組、VPA組大鼠海馬區(qū)偶見凋亡細(xì)胞； TPM組大鼠海馬區(qū)凋亡細(xì)

10、胞的數(shù)目增多。 6、Bcl-2陽性細(xì)胞的檢測結(jié)果正常對照組海馬神經(jīng)元Bcl-2陽性細(xì)胞為一些弱染的、散在的細(xì)胞； PTZ模型組海馬神經(jīng)元存在較多的Bcl-2陽性細(xì)胞，陽性細(xì)胞著色和密度均有增強； VPA組海馬神經(jīng)元Bcl-2陽性細(xì)胞較PTZ組無明顯變化； TPM組海馬神經(jīng)元Bcl-2陽性細(xì)胞較PTZ組減少，陽性細(xì)胞著色和密度均減弱，較正常對照組無明顯變化。 7、Bax陽性細(xì)胞的檢測結(jié)果正常對照組

11、海馬神經(jīng)元Bax陽性細(xì)胞為一些弱染的、散在的細(xì)胞； PTZ模型組海馬神經(jīng)元存在較密集的Bax陽性細(xì)胞分布，陽性細(xì)胞著色較深，密度增強； VPA組海馬神經(jīng)元Bax陽性細(xì)胞較PTZ組減少，陽性細(xì)胞著色和密度均減弱，較正常對照組無明顯變化； TPM組海馬神經(jīng)元Bax陽性細(xì)胞較PTZ組增多，陽性細(xì)胞著色和密度均增強。 結(jié)論： 1、成功建立了PTZ點燃的慢性癲癇大鼠模型。 2、Morris水迷宮