Th1樣細胞因子和機械力協(xié)同作用誘導(dǎo)tenascin-C在分離風(fēng)濕性心臟瓣膜間質(zhì)細胞中表達的研究.pdf

1、風(fēng)濕熱以及風(fēng)濕性心臟?。L(fēng)心病）在全世界范圍內(nèi)仍然是危害人類健康的嚴(yán)重疾病。風(fēng)心病的發(fā)病機制未明，傳統(tǒng)理論認為和A型溶血性鏈球菌的感染和宿主自身免疫反應(yīng)有關(guān)。風(fēng)濕性病變的發(fā)生部位主要在心臟瓣膜、心肌、關(guān)節(jié)等ECM成份承受機械力最大最頻繁的部位，特別是風(fēng)心病瓣膜病變的發(fā)生和承擔(dān)的壓力高低密切相關(guān)。Tenascin-C（TN-C）是細胞外基質(zhì)（ECM）重塑的一組重要分子，且是迄今為止能夠證實的由機械信號直接調(diào)控的最重要分子之一。因此，本課題

2、擬研究和機械力ECM損傷密切相關(guān)的TN-C在風(fēng)心病瓣膜中的表達和調(diào)控。
　　目的：判斷TN-C在風(fēng)濕性瓣膜?。≧HVD）患者血清中的分布。建立體外瓣膜間質(zhì)細胞培養(yǎng)體系。并通過壓力培養(yǎng)細胞裝置研究風(fēng)心病間質(zhì)細胞在機械力作用下TN-C表達的改變，從瓣膜對機械力損傷修復(fù)這一新的角度研究風(fēng)濕性心臟瓣膜病的發(fā)病機制。從而對預(yù)防和阻止風(fēng)濕性疾病對瓣膜的進行性損害提供一種新的思路，同時由于深入了對瓣膜ECM和細胞相互作用的理解，對構(gòu)建有修復(fù)功能

3、的組織工程生物心臟瓣膜有重要意義。
　　方法：收集正常對照和RHVD以及瓣膜畸形患者血清，以夾心ELISA方法測定IFN-γ、TNF-α以及TN-C水平；無菌手術(shù)獲取主動脈瓣，剝除內(nèi)皮層，膠原酶消化分離間質(zhì)細胞，體外培養(yǎng)；共聚焦染色α-平滑肌actin鑒定細胞；流式細胞術(shù)分析細胞膜表面IFN-γ和TNF-α受體分布；構(gòu)建產(chǎn)生等雙軸周期性壓力裝置；利用細胞因子和機械力作用細胞后，以實時定量RT-PCR鑒定TN-C的表達；加入不同蛋白

4、激酶阻斷劑，分析參與細胞因子和機械力誘導(dǎo)TN-C的信號傳導(dǎo)途徑。
　　結(jié)果：RHVD患者中，IFN-γ、TNF-α以及TN-C水平明顯高于正常對照及瓣膜畸形患者；成功建立瓣膜間質(zhì)細胞培養(yǎng)體系，并鑒定其主要為肌成纖維細胞；流式細胞術(shù)結(jié)果顯示RHVD瓣膜間質(zhì)細胞表面分布的IFN-γ和TNF-α受體密度較高，而且這種表達是血清依賴性的；成功構(gòu)建雙軸周期性壓力裝置；IFN-γ、TNF-α的阻斷性抗體能夠降低TN-C的轉(zhuǎn)錄，用不同的蛋白激酶

5、抑制劑，我們發(fā)現(xiàn)機械力、TNF-α、IFN-γ通過RHoA/ROCK途徑誘導(dǎo)TN-C的轉(zhuǎn)錄。同時，p38MAPK也參加了IFN-γ和TNF-α誘發(fā)TNC的表達。此外，TNF-α也通過PKC和ERK途徑誘發(fā)TN-C的表達。
　　結(jié)論：1.TN-C能作為RHVD血清活性生物標(biāo)志物；2.風(fēng)濕熱能夠改變瓣膜間質(zhì)細胞表型；3.非風(fēng)濕性瓣膜間質(zhì)細胞少量組成性表達TN-C。在風(fēng)濕性瓣膜炎的發(fā)病過程中，Th1樣細胞因子IFN-γ,TNF-α和機械