膽固醇甲酰-殼聚糖共聚物冬凌草甲素膠束的制備及其細胞動力學(xué)研究.pdf

1、殼聚糖(Chitosan,CS)是甲殼素脫乙酰化得到的一種生物高分子材料,是甲殼素的主要衍生物。殼聚糖具有很好的生物相容性、生物降解能力,低毒性和低免疫原性。殼聚糖分子中存在游離胺基和活性羥基,因此易于對殼聚糖進行結(jié)構(gòu)改造,得到不同結(jié)構(gòu)、不同功能且溶解度不同的衍生物。膠束(Micelle)是一種膠體分散體系,粒徑一般小于200nm。共聚物(Copolymer)在水中溶解后可自組裝形成由親水性外殼和疏水性內(nèi)核組成的高分子膠束。膠束作為載藥

2、系統(tǒng)具有很多優(yōu)點:提高難溶性藥物溶解度,提高藥物穩(wěn)定性和生物利用度,靶向作用和減少藥物副作用等等。
　　 本研究的目的是:利用殼聚糖的游離胺基與膽固醇甲酰氯的酰氯基團發(fā)生酰胺反應(yīng),將膽固醇甲酰氯接枝到殼聚糖上,得到具有兩親性質(zhì)的膽固醇甲酰氯修飾的殼聚糖共聚物(膽固醇甲酰-殼聚糖共聚物,CF-CS)。這種共聚物在水中可以自組裝形成膠束。用這種共聚物作為包裹冬凌草甲素(Oridonin,ORI)的載體材料制備冬凌草甲素膠束,考察其性

3、質(zhì),為冬凌草甲素的新劑型開發(fā)提供研究基礎(chǔ)。
　　 本文對合成CF-CS的工藝進行考察,并對合成產(chǎn)物進行紅外、核磁圖譜考察,紅外圖譜中可見:在1700cm-1有強吸收峰,羰基峰(-C=O)特征明顯,同時,在3500cm-1附近,有中強度吸收峰,提示結(jié)構(gòu)中有酰胺結(jié)構(gòu)存在。核磁碳譜中可見:化學(xué)位移δ=155ppm左右有吸收峰,應(yīng)為酰胺結(jié)構(gòu)直接與O原子相連的結(jié)果,氫譜中:化學(xué)位移δ=5.5ppm有吸收,提示有雙鍵存在。結(jié)果表明,合成的物

4、質(zhì)為目標產(chǎn)物。
　　 本文研究了冬凌草甲素的CF-CS膠束(ORI-CF-CS)的處方和制備工藝,考察了處方中的CF-CS與ORI質(zhì)量比,水與有機溶劑的體積比,以及制備工藝中攪拌時間和旋蒸溫度的影響,用單因素法篩選出較優(yōu)的處方和工藝。
　　 對ORI-CF-CS的藥劑學(xué)性質(zhì)進行了研究,TEM測得結(jié)果顯示,ORI-CF-CS形態(tài)為球形,基本無黏連,上面有冬凌草甲素藥物顆粒附著,與空白膠束區(qū)別明顯。膠束平均粒徑在68.10～

5、113.8nm之間,Zeta電位在-34.97～-28.19mV之問,臨界膠束濃度為1.15μg/mL。ORI-CF-CS的包封率為48.83％,載藥量為9.16％。體外釋藥的研究結(jié)果表明:在第1天,膠束存在一個突釋相,然后緩慢釋放,11天后接近90％,15天后接近100％,可見ORI-CF-CS在體外釋放緩慢。
　　 ORI-CF-CS體外抑制宮頸癌Hela細胞增殖實驗研究,以冬凌草甲素溶液為對照組,測定計算ORI-CF-CS

6、組及冬凌草甲素溶液組的吸光度值及抑制率。直接給藥48h和給藥4h換為新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)72h的結(jié)果表明:冬凌草甲素溶液作用于Hela細胞的IC50值分別是ORI-CF-CS的2.75與2.72倍。
　　 ORI-CF-CS細胞動力學(xué)研究；結(jié)果表明,Hda細胞攝取ORI-CF-CS后,在30、60、120、240和420min時,冬凌草甲素的聚集量顯著高于冬凌草甲素溶液,ORI-CF-CS可以顯著提高細胞對冬凌草甲素的攝取,增加冬