副豬嗜血桿菌HbpA蛋白功能及其致病中作用的初步研究.pdf

1、近年來副豬嗜血桿菌病呈爆發(fā)流行趨勢(shì)，死亡率高達(dá)50％，已逐漸成為世界范圍內(nèi)的重要細(xì)菌性疾病，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　為了探討副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis，HPS）HbpA蛋白的功能及其在致病中的作用，從新的角度詮釋HPS的毒力特性和感染致病機(jī)制，本研究應(yīng)用免疫蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，以新發(fā)現(xiàn)的具有免疫原性的HbpA蛋白為切入點(diǎn)，以功能基因組學(xué)為理論基礎(chǔ)，從多方面多層次探索了HbpA蛋白生物學(xué)功能，研究

2、結(jié)果如下：
　　1、利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)和技術(shù)篩選并鑒定得到HPS的一個(gè)具有免疫原性的周質(zhì)蛋白HbpA。
　　2、利用基因重組技術(shù)構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a-HbpA并誘導(dǎo)表達(dá)出可溶性的目的蛋白，大小為59.4kD，PI=7.06。
　　3、利用技術(shù)驗(yàn)證HbpA蛋白能和鼠源HbpA單抗發(fā)生特異性結(jié)合，證明了HbpA蛋白的特異性。
　　4、利用Heme-agarose法驗(yàn)證了HbpA蛋白在體外環(huán)境下能Heme結(jié)合，當(dāng)H

3、bpA的量一定時(shí)，HbpA-Heme復(fù)合體的分子量在一定的范圍內(nèi)(0mM-4mM)隨Heme濃度的升高而增大;當(dāng)Heme濃度達(dá)到一定限度(4mM)后，HbpA-Heme復(fù)合體的分子量將不再增大，而是維持在一個(gè)恒定的數(shù)值。
　　5、利用IEM技術(shù)確定野生株HbpA蛋白和Heme的復(fù)合體主要存在于細(xì)胞外膜，內(nèi)膜和細(xì)胞核。
　　6、利用免疫組化技術(shù)直觀的證明了HPS在豬肺臟內(nèi)的確表達(dá)出HbpA蛋白。
　　7、通過測(cè)定HPS的

4、生長曲線證明了Fe離子是HPS生存、繁殖的重要元素。
　　8、利用抗體體外殺菌技術(shù)證明了在體外環(huán)境下HbpA抗體能殺死近半數(shù)的HPS菌體。
　　9、利用RT-PCR技術(shù)驗(yàn)證了HPS在Fe離子缺乏的環(huán)境下體內(nèi)HbpA基因表達(dá)量是正常培養(yǎng)時(shí)的2倍。
　　本研究從分子水平闡明了HbpA蛋白在HPS的存活、繁殖和致病機(jī)制方面的功能，并從新的角度詮釋HPS的毒力特性和感染致病機(jī)制，對(duì)有效的疫苗和藥物阻斷劑的研究具有一定的理論和實(shí)