醒腦靜對(duì)大鼠腦缺血再灌注中Bcl-2-Beclin1的表達(dá)量的影響及機(jī)制的初步探討.pdf

1、目的:醒腦靜注射液(XNJ)是在著名中醫(yī)古方“安宮牛黃丸的”成分基礎(chǔ)上改制而成的靜脈注射藥劑。主要成分為麝香、冰片、桅子、郁金等,具有醒腦開(kāi)竅、化痰祛瘀、清熱解毒的功效。主要以中風(fēng)等各種腦病為適應(yīng)癥。臨床觀(guān)察證實(shí)了醒腦靜注射液治療中風(fēng)病具有較好療效,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,醒腦靜注射液對(duì)腦缺血—再灌注損傷有一定保護(hù)作用。本研究旨在探討醒腦靜在腦缺血再灌注( Ischemia Reperfusion,I/R)過(guò)程中的療效及機(jī)制。
　　方法:本

2、研究主要通過(guò) MRI探討醒腦靜對(duì) I/R的治療效果,用Western Blot檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白和抗凋亡蛋白的表達(dá),并探討XNJ可能的作用途徑。具體實(shí)驗(yàn)步驟簡(jiǎn)略如下:(1)栓線(xiàn)法制備120只體重在280~300g的模型,按Zealonga原則評(píng)分后,選取評(píng)分為2分的的MCAO模型后隨機(jī)分為2大組:MRI組和WB組。(2)MRI組隨機(jī)分為3小組:空白對(duì)照組3只,模型對(duì)照組7只,醒腦靜組10只;WB組隨機(jī)分為10組:模型組,溶媒組,醒腦靜0.

3、5ml組,醒腦靜1.0ml組,醒腦靜1.5ml組,醒腦靜2.0ml組,3-MA組,3-MA+醒腦靜組,雷帕霉素(Rapa)組,Rapa+醒腦靜組。其中MRI組通過(guò)影像學(xué)探討醒腦靜對(duì)I/R的治療效果;醒腦靜0.5ml組,醒腦靜1.0ml組,醒腦靜1.5ml組,醒腦靜2.0ml組等四組研究醒腦靜治療 I/R的效果與醒腦靜使用劑量之間的關(guān)系;模型組,醒腦靜2.0ml組,3-MA組,3-MA+醒腦靜組,雷帕霉素(Rapa)組,Rapa+醒腦靜組

4、等六組間,通過(guò)陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照組,研究 XNJ可能的作用方式和途徑。(3)每只模型按要求均予腹腔給藥:空白組僅作頸部血管分離處理;模型組作MOCA模型處理;以下各組均在MOCA模型的基礎(chǔ)上,注射相應(yīng)的藥物。溶媒組經(jīng)腹腔折射3ml雙蒸水;醒腦靜0.5ml組,醒腦靜1.0ml組,醒腦靜1.5ml組,醒腦靜2.0ml組分別腹腔注射0.5、1.0、1.5、2.0ml的XNJ;3-MA按1mg/只的標(biāo)準(zhǔn)腹腔注射3-MA;3-MA+醒腦靜組在3

5、-MA基礎(chǔ)上,腹腔注射2.0ml的XNJ,Rapa組按1mg/只標(biāo)準(zhǔn),腹腔注射1mgRapa;Rapa+XNJ組在Rapa組的基礎(chǔ)上,腹腔注射2.0mlXNJ。(4)造模成功24h后,MRI組模型檢測(cè)用藥前后模型腦梗體積的變化;WB組先提取腦組織蛋白,然后用WB檢測(cè)組織內(nèi)自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)量。
　　結(jié)果:(1)在MRI部分,各組大鼠給藥24小時(shí)后的腦梗體積均大于給藥前的腦梗體積,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);(2)MRI顯示

6、,醒腦靜組的腦梗體積變化量小于模型組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);(3)與模型組相比,醒腦靜組的Beclin1和LC3的表達(dá)量均降低, Bcl-2的表達(dá)量升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);(4)Bcl-2蛋白在醒腦靜高劑量組中的表達(dá)量高于低劑量組,Beclin1和LC3在高劑量組的表達(dá)量低于低劑量組,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);(5) Bcl-2與Beclin1之間的表達(dá)量之間的相關(guān)系數(shù) r=-0.91,對(duì)

7、r進(jìn)行 t檢驗(yàn),(P<0.05);(6)醒腦靜+3-MA組中Beclin1和LC3的表達(dá)量低于其他兩組,Bcl-2的表達(dá)量則高于其它兩組,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);(7)醒腦靜+雷帕組Beclin1和LC3的表達(dá)量大于醒腦靜組、小于雷帕組,Bcl-2的表達(dá)量則小于醒腦靜組、大于雷帕組,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:(1)醒腦靜可抑制腦缺血再灌注過(guò)程中的自噬反應(yīng);(2)醒腦靜對(duì)自噬的抑制作用與醒腦靜的