脂肪細胞AMPK與TLR-NF-κΒ信號通路交互作用機制的研究.pdf

1、目的：研究脂肪細胞AMPK激活對免疫炎癥信號通路TLR4/NF-кB活性及炎癥因子（IL-6、TNF-a、FFA）的影響及脂肪細胞免疫炎癥信號通路TLR4/NF-кB處于激活狀態(tài)下，對AMPK活性的影響，為闡明肥胖啟動炎癥的分子機制和治療肥胖及肥胖相關疾病提供新的基礎理論和實驗依據。
　　方法：培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細胞誘導分化為成熟脂肪細胞，實驗分為兩部分，第一部包含空白對照組，CompoundC組，AICAR組，第二部包含空白

2、對照組，LPS組，尼古丁組。1.Westeronblot檢測空白對照組NF-кBp65和AMPK磷酸化水平。2.AICAR（或CompoundC）作用脂肪細胞1小時，Westeronblot檢測脂肪細胞NF-кBp65和AMPK磷酸化水平，ELISA檢測細胞培養(yǎng)液中炎癥因子IL-6與TNF-a表達水平；比色法檢測細胞培養(yǎng)液中FFA含量。3.LPS（或尼古?。┳饔弥炯毎?小時，Westeronblot檢測脂肪細胞AMPK和NF-кBp6

3、5磷酸化水平。
　　結果：
　　[1]AICAR作用于成熟脂肪細胞后，AMPK磷酸化水平較空白對照組顯著增高（P<0.01），NF-кBp65磷酸化水平較空白對照組顯著降低（P<0.01）。
　　[2]CompoundC作用于成熟脂肪細胞后，AMPK磷酸化水平較空白對照組顯著降低（P<0.01），NF-кBp65磷酸化水平較空白對照組升高（P<0.05）。
　　[3]細胞培養(yǎng)液中IL-6分泌表達水平AICAR組較

4、空白對照組降低（P<0.05），而CompoundC組較空白對照組升高（P<0.05）。空白組為112.33±4.932pg/ml，AICAR組為84.33±4.509pg/ml，CompoundC組為141.667±11.5036pg/ml。
　　[4]TNF-a表達水平AICAR組平較空白對照組顯著降低（P<0.01），CompoundC組較空白對照組升高（P<0.05）空白組為177.6667±2.5166），ARCAR組為

5、115.6667±4.509pg/ml，CompoundC組為194.667±5.5076pg/ml。
　　[5]FFA含量ARCAR組較空白對照組顯著降低（P<0.01），CompoundC組較空白對照組顯著升高（P<0.01）?？瞻捉M為174.01±2.01502μmol/L，ARCAR組為107.73±2.18831μmol/L，CompoundC組為765.20±3.23-7414μmol/L。
　　[6]LPS作用

6、于成熟脂肪細胞后，NF-кBp65磷酸化水平較空白對照組顯著增加（P<0.01），AMPK磷酸化水平較空白對照組顯著降低（P<0.01）。
　　[7]尼古丁作用于成熟脂肪細胞后，NF-кBp65磷酸化水平較空白對照組降低（P<0.05），AMPK磷酸化水平較空白對照組顯著增加（P<0.01）。
　　結論：本實驗明確了AMPK與NF-κΒ之間存在負相關作用，肥胖時機體出現(xiàn)的慢性炎癥狀態(tài)可能與AMPK活性降低，NF-κΒ信號增強