電針對大鼠腦缺血后腦水腫的調(diào)節(jié)作用及其機制初探.pdf

1、中風(fēng)為急性腦血管疾病，由于腦血管的破裂或阻塞導(dǎo)致局部神經(jīng)細胞的損傷，引發(fā)神經(jīng)功能障礙。中風(fēng)后的腦水腫也是引起中風(fēng)病人致死致殘的重要繼發(fā)癥狀。腦水腫的發(fā)病機理十分復(fù)雜，近年來研究發(fā)現(xiàn)水通道蛋白(aquaporin，AQP)可能參與了這一過程。
　　針灸治療腦卒中在我國歷史悠久，臨床治療中，針刺干預(yù)對中風(fēng)患者功能恢復(fù)有良好的效果，但其治病機制尚未最終明晰。本研究在以往工作基礎(chǔ)上，以大鼠大腦中動脈栓塞/再灌注(MCAO)為模型，利用核磁

2、共振(magnetic resonanceimaging，MRI)觀察電針干預(yù)對腦缺血再灌注損傷所致腦水腫的動態(tài)調(diào)節(jié)，并試圖從AQP4的磷酸化修飾以及四聚化水平的變化，闡明電針抗腦缺血效應(yīng)的可能機制，為針刺療法的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
　　主要研究結(jié)果如下:
　　1.電針對缺血再灌所致腦水腫及血腦屏障滲漏的影響
　　利用MRI的T2掃描，我們檢測了大鼠紋狀體及皮層在缺血以及電針干預(yù)后的組織含水量的變化。
　　再灌

3、3小時，電針組紋狀體和皮層(95.18±5.84，91.75±8.08)相比較缺血組紋狀體和皮層(106.18±9.03，110.60±10.85)的T2值有略微下降。
　　再灌5小時，電針組紋狀體的T2值(108.81±5.53)相比較缺血組(144.48±19.23，P＜0.05)有顯著減小，并且電針組皮層的T2值(100.86±7.85)相比較缺血組(128.90±12.58，P＜0.05)亦有顯著降低。
　　再灌24

4、小時，電針組紋狀體的T2值(125.12±5.02)比缺血組(141.9±7.37，P＜0.05)仍有顯著減小，而電針組皮層的T2值(120.06±5.47)相比較缺血組(152.60±10.80，P＜0.05)的升高亦有顯著。
　　再灌48小時，缺血側(cè)紋狀體和皮層的T2值與再灌24小時相比，增加仍極其顯著(P＜0.01)，但是電針組紋狀體和皮層的T2值(133.26±7.98，142.4±6.85)相比較缺血組的(152.65±

5、6.66，154±7.62)并無顯著差異。
　　利用MRI的T1掃描，我們檢測了大鼠在缺血以及電針干預(yù)后血腦屏障滲漏的變化。
　　再灌3小時，post-contrast T1 SIdiff值在缺血組(20.91±2.25)同側(cè)組織相比較電針組(19.38±1.03)略微有所增加。到再灌5小時時，缺血組與電針組的差距進一步擴大，缺血組(21.88±1.99)的post-contrast T1SIdiff值比電針組(17.63±

6、5.09)高很多。血腦屏障有雙向開放過程，再灌24小時，未檢測到血腦屏障滲透。到再灌48小時，缺血組T1Sidiff值(19.09±7.02)與電針組(9.37±0.97)有顯著差異。
　　通過T1掃描，PBV代表造影劑滲出血腦屏障浸入腦組織的體積。在再灌3小時，缺血組PBV(0.051±0.017cm3)的增加是電針組(0.020±0.002 cm3，P=0.06)的兩倍。再灌5小時，缺血組PBV值(0.093±0.018 cm

7、3)顯著高于電針組(0.019±0.0005 cm3，P＜0.05)和再灌3小時的值(P＜0.05)。再灌48小時，血腦屏障的滲出量低于再灌5小時，但是缺血組的PBV值(0.055±0.009 cm3)仍然高于電針組(0.030±0.007 cm3，P=0.05)。
　　在再灌3小時，血腦屏障的總滲透量(T1Sidiff×PBV)在缺血組(1.067±0.46)高于電針組(0.378±0.03，P=0.07)。到再灌5小時，T1S

8、Idiff×PBV的值在缺血組(2.043±0.53)相比較電針組(0.326±0.08，P＜0.05)有顯著增加。到再灌48小時，T1SIdiff×PBV的值在缺血組(1.056±0.14)相比電針組(0.284±0.05，P＜0.01)有更顯著的增加。
　　2.電針對缺血再灌后大鼠神經(jīng)功能的影響
　　利用Garcia量表，我們對缺血再灌72小時后大鼠的神經(jīng)功能進行評分，結(jié)果顯示缺血組的自主活動、外展以及反應(yīng)性明顯弱于電針

9、組。
　　3.電針對缺血再灌72小時后大鼠腦梗死和腦腫脹程度的影響
　　再灌72小時后，尼氏染色顯示，電針組大腦梗死百分率(0.247±0.02，P＜0.05)與缺血組(0.413±0.07)相比明顯減小(P＜0.05)。與缺血組相比，再灌后72小時的腦腫脹程度也有所減輕。
　　4.電針對缺血再灌后大鼠腦內(nèi)AQP4蛋白磷酸化修飾的影響再灌3h時，磷酸化AQP4蛋白在缺血組大鼠的大腦皮層的表達高于對照組，電針組(1.23

10、±0.26)與缺血組(1.54±0.16，P＜0.05)相比則明顯的減少，而紋狀體也有同樣的變化趨勢。
　　再灌1天時，磷酸化AQP4在缺血組(0.83±0.22)的表達量明顯下降，明顯低于對照組(1.62±0.27，P＜0.05)，同時與電針組相比也有所降低(0.91±0.24，P=0.06)。而在紋狀體這三組沒有明顯的變化。
　　5.電針對缺血再灌后大鼠腦內(nèi)AQP4的M1和M23亞型mRNA含量的影響通過real tim

11、e PCR檢測AQP4 M1和M23兩種亞型的mRNA含量的變化，比較腦缺血以及電針干預(yù)對其的影響。
　　再灌3小時后，電針組與缺血組相比M1 mRNA的表達量較低(EA/is為0.91)，但是缺血組較對照組有所升高（is/con為1.25）。再灌24小時，電針組的表達量達到缺血組的2.42倍(P＜0.05)，而缺血組仍然高于對照組(is/con為1.32)。再灌3天時，電針組和缺血組相比雖沒有顯著性差異，但是上升趨勢較為明顯(1

12、0.66)，缺血組與對照組相比有明顯的增加(1.82，P＜0.05)。
　　M23 mRNA表達量的變化與M1相應(yīng)時間點上的變化相似，再灌3小時時電針組是缺血組的0.94倍，但是缺血組與對照組相比有所增加(is/con為1.27)，再灌24小時時，電針組增長到缺血組的2.42倍，具有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異，而缺血組仍然高于對照組(is/con為1.32)。再灌3天時，電針組與缺血組相比雖然沒有統(tǒng)計學(xué)差異，但是電針組是缺血組的9.76倍，

13、而缺血組則是對照組的2.58倍，具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。
　　同時我們分析M1 mRNA和M23 mRNA比值在不同灌注時間后的變化。對照組M1與M23的比值是0.691。再灌3h，缺血組(0.678)M1與M23的比值和電針組(0.691)接近一致。再灌24h，缺血組(0.725)M1與M23的比值和電針組(0.696)相比有明顯的提高。再灌3天，缺血組(0.912) M1與M23的比值和電針組(0.762)相比有所提高。

14、　　6.電針對缺血再灌后大鼠腦內(nèi)AQP4四聚化的影響
　　腦缺血再灌注后，無論在缺血側(cè)皮層還是紋狀體，AQP4四聚化程度均呈現(xiàn)動態(tài)變化。我們分析了缺血再灌3小時、1天和3天的數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)AQP4四聚化程度呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，在第1天時達到最高峰。皮層在第1天時，電針組四聚化程度明顯低于缺血組(P＜0.05)，而紋狀體在第3天時，電針組四聚化程度明顯低于缺血組(P＜0.05)，電針可影響腦缺血再灌注后的AQP4四聚化程度。

15、　　小結(jié):
　　1)電針能明顯降低腦缺血再灌注后的腦梗死及腦水腫，減弱因缺血而導(dǎo)致的血腦屏障開放程度，并改善腦缺血后受損的神經(jīng)功能，具有對抗腦缺血后神經(jīng)損傷的保護作用。
　　2)缺血性腦水腫進程中伴隨有AQP4磷酸化修飾水平的改變，而電針在再灌早期（再灌后3小時）可以下調(diào)AQP4的磷酸化水平。
　　3)電針可以提高AQP4 M1和M23兩種亞型的mRNA表達，并隨再灌時間延長逐步下調(diào)M1/M23的配比水平。