IL-6-STAT3信號(hào)通路介導(dǎo)胃癌間質(zhì)干細(xì)胞與中性粒細(xì)胞相互作用促進(jìn)胃癌進(jìn)展.pdf

1、目的:探討胃癌間質(zhì)干細(xì)胞(GC-MSCs)對(duì)中性粒細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用、機(jī)制及生物學(xué)意義，為揭示MSCs通過重塑胃癌微環(huán)境促進(jìn)胃癌作用提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　(1)采用GC-MSCs條件培養(yǎng)基處理中性粒細(xì)胞，MTT實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)中性粒細(xì)胞存活和凋亡情況，Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)中性粒細(xì)胞IL-8、OSM、CCL2和TNF-α基因表達(dá)情況;采用GC-MSCs條件

2、培養(yǎng)基處理的中性粒細(xì)胞作用于胃癌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞，檢測(cè)胃癌細(xì)胞遷移能力和內(nèi)皮細(xì)胞管形成能力變化。
　　(2)采用GC-MSCs條件培養(yǎng)基處理中性粒細(xì)胞，Western blot檢測(cè)中性粒細(xì)胞STAT3和ERK等信號(hào)通路活化情況。采用小分子抑制劑阻斷中性粒細(xì)胞內(nèi)STAT3或ERK信號(hào)通路活化，檢測(cè)對(duì)中性粒細(xì)胞凋亡、活化和功能的影響。
　　(3)采用Luminex液相芯片技術(shù)篩選GC-MSCs條件培養(yǎng)基中調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞活化和功

3、能的關(guān)鍵因子，并用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和ELISA進(jìn)行驗(yàn)證。采用特異性抗體阻斷劑阻斷關(guān)鍵因子作用，檢測(cè)其對(duì)GC-MSCs條件培養(yǎng)基活化中性粒細(xì)胞的影響。
　　(4)采用GC-MSCs條件培養(yǎng)基活化的中性粒細(xì)胞上清作用于正常MSCs，Western blot和免疫熒光染色檢測(cè)MSCs中CAFs標(biāo)志物α-SMA和vimentin表達(dá)變化。收集經(jīng)活化中性粒細(xì)胞誘導(dǎo)的MSCs上清，采用細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)活化中性粒細(xì)胞誘導(dǎo)MSCs向CAFs分化

4、對(duì)胃癌細(xì)胞遷移能力的影響。
　　結(jié)果:
　　(1)GC-MSCs條件培養(yǎng)基促進(jìn)中性粒細(xì)胞存活，并抑制其自發(fā)性凋亡。GC-MSCs條件培養(yǎng)基處理中性粒細(xì)胞，上調(diào)其IL8、CCL2和TNF-α等炎癥因子表達(dá)。GC-MSCs條件培養(yǎng)基活化的中性粒細(xì)胞顯著促進(jìn)胃癌細(xì)胞遷移和內(nèi)皮細(xì)胞管狀結(jié)構(gòu)的形成。
　　(2)GC-MSCs條件培養(yǎng)基主要通過激活中性粒細(xì)胞STAT3-ERK1/2信號(hào)通路而活化中性粒細(xì)胞。阻斷STAT3-ERK1

5、/2信號(hào)通路顯著抑制GC-MSCs條件培養(yǎng)基對(duì)中性粒細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用，抑制其對(duì)中性粒細(xì)胞IL8、CCL2和TNF-α表達(dá)的誘導(dǎo)作用;減弱其對(duì)胃癌細(xì)胞遷移和內(nèi)皮細(xì)胞管形成的促進(jìn)作用。
　　(3)Luminex分析揭示GC-MSCs分泌高水平的IL6。拮抗IL6/IL6R作用明顯抑制GC-MSCs對(duì)中性粒細(xì)胞的活化作用，并抑制其對(duì)胃癌細(xì)胞遷移和內(nèi)皮細(xì)胞管形成的促進(jìn)作用。
　　(4)GC-MSCs活化的中性粒細(xì)胞上清誘導(dǎo)正常MS