生長(zhǎng)分化因子5誘導(dǎo)下自組裝培養(yǎng)形成軟骨組織的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討通過(guò)“自組裝”（Self-Assembly）培養(yǎng)技術(shù)，以生長(zhǎng)分化因子5（GDF-5）誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（hMSCs)，分化形成軟骨組織的可能性及效果。
　　 方法：將健康成人第3代hMSCs分別用含GDF-5的軟骨誘導(dǎo)液和無(wú)GDF-5的軟骨誘導(dǎo)液定向誘導(dǎo)培養(yǎng)。軟骨方向定向誘導(dǎo)3周后重懸細(xì)胞，接種于預(yù)鋪瓊脂糖的培養(yǎng)板，進(jìn)行自組裝培養(yǎng)，形成組織團(tuán)塊。對(duì)含GDF-5誘導(dǎo)和無(wú)GDF-5誘導(dǎo)培養(yǎng)的自組裝組織團(tuán)塊經(jīng)行大體觀察；

2、RT-PCR檢測(cè)組織團(tuán)塊Ⅱ型膠原和蛋白多糖mRNA的表達(dá)；HE染色觀察自組裝組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)；免疫組織化學(xué)、阿利新藍(lán)染色、甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)誘導(dǎo)細(xì)胞Ⅱ型膠原和蛋白多糖表達(dá)。對(duì)免疫組織化學(xué)圖像每個(gè)視野下陽(yáng)性反應(yīng)物的平均光密度進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)比兩組進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果：通過(guò)對(duì)hMSCs的自組裝培養(yǎng)，形成了類(lèi)似軟骨的組織團(tuán)塊。Ⅱ型膠原和蛋白多糖mRNA表達(dá)明顯，免疫組織化學(xué)顯示Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)陽(yáng)性，阿利新藍(lán)染色和甲苯胺藍(lán)染色顯示蛋白多糖表達(dá)