紫外線誘導(dǎo)人角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子及其機(jī)理研究.pdf

1、背景：紫外線輻射(UltravioletRadiation，UVR)可引起皮膚炎癥反應(yīng)。人體皮膚的主要組成細(xì)胞—人角質(zhì)形成細(xì)胞(HumanKeratinocytes，HKC)可接受各種外界刺激，激活胞內(nèi)復(fù)雜的信號傳遞機(jī)制，合成多種細(xì)胞因子。UVR可誘導(dǎo)HKC表達(dá)包括IL-8在內(nèi)的多種炎癥細(xì)胞因子，但其誘導(dǎo)皮膚炎癥的機(jī)理，特別是炎癥信號涉及的受體分子及信號傳導(dǎo)途徑，尚缺少明確的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目的：觀察中波紫外線(UltravioletB，UV

2、B)對HKCIL-8表達(dá)的影響，并初步探討其細(xì)胞信號傳導(dǎo)的通路和機(jī)制。 方法：1.人角質(zhì)形成細(xì)胞株HaCaT以不同強(qiáng)度UVB(10～80mJ/cm2)照射，培養(yǎng)24h后ELISA法檢測上清液中IL-8的濃度。2.用相同強(qiáng)度UVB(30mJ/cm2)照射HKC后1h、3h、6h、12h、24h收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，檢測IL-8的濃度。3.UVB(40mJ/cm2)照射HKC，分別于照射后0h、0.5h、1h、2h、4h時(shí)收集細(xì)胞胞漿蛋

3、白和核蛋白，Westernblotting法檢測NF-κB信號傳導(dǎo)通路中的重要分子IκB-α、磷酸化IκB-α和NF-κBp65蛋白的動態(tài)變化，以及MAPK家族的蛋白分子ERK1/2、p38、c-JNK等磷酸化激活的動態(tài)變化。4.用重組腺病毒將MyD88突變體轉(zhuǎn)入HKC，UVB照射后24h檢測HKC產(chǎn)生IL-8的水平。5.HKC用40mJ/cm2的UVB照射后，加入0μg/ml、10μg/ml、50μg/ml蘆薈多糖，培養(yǎng)24h后收集上

4、清，檢測IL-8濃度。 結(jié)果：1.UVB照射可使HKC分泌IL-8增加，其濃度隨UVB的照射量(由10mJ/cm2增加到40mJ/cm2)呈強(qiáng)度依賴性。當(dāng)UVB為40mJ/cm2時(shí)，IL-8濃度達(dá)到最高水平。2.30mJ/cm2強(qiáng)度的UVB照射后，細(xì)胞分泌IL-8的量1h后就開始增加，12h時(shí)達(dá)到高峰。3.Westernblotting檢測示UVB照射后0.5h時(shí)IκB-α就開始發(fā)生磷酸化和降解，在第2h、4h時(shí)更加明顯；細(xì)胞核

5、蛋白P65的量在照射后0.5h開始升高，在隨后的2h時(shí)達(dá)到高峰。UVB照射后10minHKC內(nèi)的ERK1/2、p38、c-JNK蛋白的磷酸化就開始增加。4.重組腺病毒將MyD88突變體轉(zhuǎn)染HKC后，降低了UVB誘導(dǎo)的IL-8表達(dá)。5.蘆薈多糖可明顯減少UVB照射HKC所致IL-8增加，該差異有顯著性(p＜0.05)，而不同濃度的蘆薈多糖(10μg/ml和50μg/ml)間相比無顯著性差異(p＞0.05)。 結(jié)論：1.UVB可顯著