地龍生物祛痰藥物的研究.pdf

1、本研究對從地龍(蚯蚓)組織中提取的一種以脫氧核糖核酸酶(DNA酶)活性成分為主的多組分生物祛痰藥物進行了有關(guān)制備工藝、生物活性、質(zhì)量標準、主要藥效學及毒理學等方面的研究，科學、較系統(tǒng)全面地論證了它作為一種新型的，原料來源廣泛的，成本低廉的，用于呼吸系統(tǒng)疾病治療的祛痰藥物的可行性，研究結(jié)果證明，它具有高效、安全、療效確切的作用特點，為下一步應(yīng)用于臨床治療提供了豐富的實驗數(shù)據(jù)和堅實的理論基礎(chǔ)。 一、制備工藝的研究經(jīng)過反復篩選實驗，最

2、終得到了一條高效、穩(wěn)定、快速的提取制備工藝路線，由此工藝從地龍組織中得到的具有祛痰作用的生物藥物，最大程度地保留了DNA酶活性成分的生物學效應(yīng)。 在此工藝中，采取機械勻漿法進行蚯蚓組織破碎；pH4.6的緩沖液進行抽提；隨后分別采取了有機溶劑沉淀、等電點沉淀、透析、超濾等一系列蛋白質(zhì)提取純化的方法，并在每一步操作后，均應(yīng)用Bradford法對所得產(chǎn)物進行了總蛋白濃度測定；運用免疫酶單向擴散法對所得產(chǎn)物進行了DNA酶活力的測定，從而

3、有力地保證了所得產(chǎn)物的質(zhì)量。 二、理化性質(zhì)、主要生物學活性及質(zhì)量標準的研究為了能夠深入的了解地龍生物祛痰藥物的理化性質(zhì)，對其進行了多種理化性質(zhì)穩(wěn)定性的實驗研究。實驗結(jié)果顯示，本藥物耐酸、耐熱；乙醇等有機溶劑不會破壞其生物學活性；常見的生物制劑(如血清、干擾素等)或生物酶類(如蛋白酶K、RNA酶A、溶菌酶等)不會對其活性產(chǎn)生抑制作用。 為了能夠探索本藥物的作用機制，對其進行了生物學活性的檢測。從檢測結(jié)果可以看出，DNA酶是

4、本藥物中含量最豐富的成分，其比活力達到16.14U/mg；同時還具有較強的蛋白酶、RNA酶及溶菌酶等活性，它們相互協(xié)同，共同發(fā)揮藥理作用。 結(jié)合以上實驗數(shù)據(jù)與結(jié)果，進一步研究制定了地龍生物祛痰藥物的質(zhì)量標準草案，規(guī)定了檢查、鑒別、效價測定等內(nèi)容，為藥物的生產(chǎn)提供了指導與標準，使產(chǎn)品的質(zhì)量得到了監(jiān)控與保障。 三、藥效學的實驗研究通過對本藥物有效成分的活性研究的結(jié)果可知，它是一種以DNA酶為主要成分的多組分生物藥物，這決定了

5、本藥物具有多重藥效學作用。 在實驗中使小鼠霧化吸入酚紅生理鹽水，通過檢測小鼠氣管洗液中的酚紅吸光度來反映本藥物對氣管粘膜的分泌能力的影響；采用小鼠氨水引咳模型，說明本藥物對此模型的小鼠咳嗽潛伏期及咳嗽次數(shù)的影響；通過檢測油酸所致急性肺損傷模型大鼠肺組織內(nèi)TNF、IL-6、IL-2的表達量變化來說明本藥物對肺內(nèi)炎性分子表達的影響；采用液體稀釋法測定本藥物對金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌等呼吸道感染常見病原菌的最小殺菌濃度；利用雞

6、胚感染實驗來觀察本藥物對常見病毒的殺滅效果。 以上實驗結(jié)果可以說明本藥物具有稀釋痰液，促進痰液排出；減少咳嗽次數(shù)，減輕患者痛苦；殺滅常見呼吸道病原微生物，控制感染；抑制肺內(nèi)炎性因子的表達，減少肺損傷等多重藥物效應(yīng)。 四、毒理學的實驗研究為了觀察評價應(yīng)用本藥物后產(chǎn)生的毒性及其程度，分別進行了相應(yīng)的急性毒性、長期毒性及特殊毒性的動物試驗，為臨床使用本藥物的安全性提供了實驗依據(jù)。 通過小鼠滴鼻給藥和灌胃給藥急性毒性試驗