高甘油三酯血癥對大鼠胰腺腺泡細(xì)胞損傷機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的： 高甘油三酯血癥(HTG)是急性胰腺炎的發(fā)病誘因之一，目前其機(jī)制尚未完全闡明。本研究通過飲食誘導(dǎo)建立高甘油三酯血癥大鼠模型，并且原代分離培養(yǎng)大鼠胰腺腺泡細(xì)胞，觀察HTG對大鼠胰腺腺泡細(xì)胞形態(tài)、酶分泌功能、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平的影響，旨在探討HTG對大鼠胰腺腺泡細(xì)胞的損傷機(jī)制，并為闡述高甘油三酯血癥性胰腺炎的發(fā)病機(jī)制提供部分實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 研究方法： 1、斷奶一周雄性SD大鼠隨機(jī)分為高脂飲食組和正常飲食

2、組，每組10只，分別給予高脂飼料和正常飼料喂養(yǎng)四周。測定血漿甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)及游離脂肪酸(FFA)水平，光鏡、透射電鏡下觀察胰腺腺泡細(xì)胞形態(tài)。 2、膠原酶消化法分離高脂飲食組和正常飲食組大鼠胰腺腺泡細(xì)胞，臺盼蘭拒染法檢測細(xì)胞活力。給予八肽膽囊收縮素(CCK一8)刺激胰腺腺泡細(xì)胞，測定淀粉酶和乳酸脫氫酶(LDH)釋放比例。透射電鏡下觀察CCK一8對胰腺腺泡細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT—PCR)法檢測

3、胰腺腺泡細(xì)胞受到CCK一8刺激后凋亡相關(guān)基因bcl一2和bax的表達(dá)變化。 3、采用特異性鈣離子熒光探針(Fluo-3-AM)染色，激光共聚焦掃描顯微鏡測定CCK一8及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜鈣一ATP酶抑制劑Thapsigargin(Tpg)對胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光強(qiáng)度的影響，間接反映細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。 主要結(jié)論及意義： l、高脂飲食四周成功建立高甘油三酯血癥大鼠模型，大鼠血漿TG和FFA水平明顯升高，并且胰腺腺泡細(xì)胞

4、形態(tài)學(xué)發(fā)生改變。 2、高甘油三酯血癥降低大鼠胰腺腺泡細(xì)胞對體外培養(yǎng)環(huán)境的耐受能力，長時(shí)間培養(yǎng)后細(xì)胞活力明顯下降。 3、高甘油三酯血癥增強(qiáng)大鼠胰腺腺泡細(xì)胞對促分泌劑CCK-8的敏感性。受到CCK一8刺激后，高脂組細(xì)胞淀粉酶釋放比例較正常組增高，提示高甘油三酯血癥損傷大鼠胰腺腺泡細(xì)胞外分泌功能。 4、高脂組大鼠胰腺腺泡細(xì)胞受到CCK一8刺激后釋放LDH較正常組增多，且電鏡觀察到細(xì)胞凋亡和壞死等改變，此外凋亡相關(guān)基因b