血栓性心肌缺血模型的建立及雙參寧心膠囊的干預(yù)作用.pdf

1、心血管疾病是人類病死率最高的疾病之一，而缺血性心臟病在其中起主導作用。目前心肌缺血動物模型存在對動物損傷大，血管栓塞后不能再通，與心肌缺血臨床發(fā)病機制尚有很大差異等缺點。在實驗動物的選擇，制備模型的實驗技術(shù)，尤其是心肌缺血動物模型的標準還有待統(tǒng)一和確定。中藥抗心肌缺血的實驗研究亦取得很大進展，在中藥復(fù)方研究的基礎(chǔ)上，已較多應(yīng)用中藥的有效成分和有效部位進行實驗研究。但存在模型制備簡單，制備的心肌缺血動物模型不符合中藥作用的特點。由于模型制

2、備方法的缺陷，無法確切觀察中藥對心肌缺血動物心功能的長期藥效影響和特點，急需開展新的心肌缺血動物模型的方法學研究。 本課題首先開展一種新型的心肌缺血模型制備方法的探索研究，應(yīng)用C型臂X光機，采用介入技術(shù)，分別探討了小型豬左前降支(Leftanteriordescending，LAD)球囊拉傷、LAD注射凝血酶、LAD球囊拉傷加凝血酶注射、LAD內(nèi)置入狹窄器、高脂飼料喂飼加LAD球囊拉傷和LAD內(nèi)注入自體血栓的方法制備心肌缺血模型

3、。經(jīng)過對以上方法的比較，最終選擇應(yīng)用小型豬LAD內(nèi)注入自體血栓的方法來開展進一步的研究。在此模型的基礎(chǔ)上，本課題連續(xù)多日觀察了抗心肌缺血藥物雙參寧心膠囊對模型動物冠狀動脈造影、30點體表心電圖、無創(chuàng)血流動力學、常規(guī)超聲測量和心肌組織多普勒分析、生化、定量組織學、病理組織形態(tài)學等一系列反映心功能指標的影響和作用特點。 1介入技術(shù)制備心肌缺血動物模型方法的探索1.1單純球囊拉傷LAD法制備小型豬心肌缺血模型的研究1.1.1方法實驗選

4、用小型豬，耳靜脈注射戊巴比妥鈉麻醉后，分離右側(cè)頸總動脈，置入6F動脈鞘管，以Launcher6F右冠導引導管置于左冠狀動脈開口行左冠狀動脈造影，造影后置入球囊導絲，在導絲指引下置入2.5mm或3.0mm球囊至冠狀動脈LAD中部，以10atm打開球囊堵閉LAD，擴張3次。 1.1.2結(jié)果小型豬經(jīng)球囊擴張拉傷3天后，冠狀動脈造影顯示LAD狹窄不明顯，以定量組織學N-BT染色法顯示心肌缺血范圍，心肌缺血亦不明顯。 1.2LAD

5、內(nèi)注射凝血酶法制備小型豬心肌缺血模型的研究1.2.1方法實驗選用小型豬，耳靜脈注射戊巴比妥鈉麻醉后，分離右側(cè)頸總動脈，置入6F動脈鞘管，以Launcher6F右冠導引導管置于左冠狀動脈開口行左冠狀動脈造影，造影后置入球囊導絲，在導絲指引下置入2.5mm球囊(球囊已被剪破，方便凝血酶注射)至冠狀動脈LAD中部，注入0.5ml50U凝血酶。 1.2.2結(jié)果小型豬LAD內(nèi)注入凝血酶7天后，冠狀動脈造影顯示LAD栓塞不明顯，以定量組織學

6、N-BT染色法顯示心肌缺血范圍，心肌缺血亦不明顯。 1.3球囊拉傷LAD加凝血酶局部注射法制備小型豬心肌缺血模型的研究1.3.1方法實驗選用小型豬，耳靜脈注射戊巴比妥鈉麻醉后，分離右側(cè)頸總動脈，置入6F動脈鞘管，以Launcher6F右冠導引導管置于左冠狀動脈開口行左冠狀動脈造影，造影后置入球囊導絲，在導絲指引下置入球囊至冠狀動脈LAD中部，球囊拉傷LAD后在局部注入0.5ml50U凝血酶。 1.3.2結(jié)果小型豬LAD球

7、囊拉傷加局部注入凝血酶的方法造模7天后，冠狀動脈造影顯示LAD內(nèi)徑變細，內(nèi)壁粗糙，以定量組織學N-BT染色法顯示心肌缺血范圍，LAD狹窄的小型豬心肌出現(xiàn)蒼白梗死灶。病理觀察可見心肌變性、心肌細胞空泡樣變性壞死，在壞死的心肌纖維之間及心肌纖維與肉芽組織交界區(qū)見大量嗜中性粒細胞浸潤，血管腔充滿血栓。 1.4LAD內(nèi)置入狹窄器法制備小型豬心肌缺血模型的研究1.4.1方法實驗選用小型豬，耳靜脈注射戊巴比妥鈉麻醉后，分離右側(cè)頸總動脈，置入

8、6F動脈鞘管，以Launcher6F右冠導引導管置于左冠狀動脈開口行左冠狀動脈造影，分別在導絲指引下應(yīng)用改裝的球囊將不同型號的狹窄器推送到LAD中部。 1.4.2結(jié)果小型豬LAD置入狹窄器7天后，冠狀動脈造影顯示小型豬LAD內(nèi)徑變細，幾乎完全堵塞，心臟肉眼可見狹窄器仍置于LAD中部，以定量組織學N-BT染色法顯示心肌缺血范圍，小型豬心肌出現(xiàn)蒼白梗死灶。 1.5球囊拉傷LAD加高脂飼料法制備小型豬心肌缺血模型的研究1.5.

9、1方法實驗選用小型豬，先給予高脂飼料喂養(yǎng)2周后，耳靜脈注射戊巴比妥鈉麻醉后，分離右側(cè)頸總動脈，置入6F動脈鞘管，以Launcher6F右冠導引導管置于左冠狀動脈開口行左冠狀動脈造影，造影后置入PTCA球囊導絲，在導絲指引下置入2.5mm或3.0mm球囊至冠狀動脈LAD中部，以10atm打開球囊堵閉LAD，擴張3次。術(shù)后繼續(xù)給予高脂飼料2月。 1.5.2結(jié)果給予高脂飼料和LAD球囊擴張拉傷2月后，小型豬LAD造影顯示LAD內(nèi)徑變細

10、，內(nèi)壁粗糙，血清TRIG、CHO、HDL-C、LDL-C均明顯升高，病理組織學檢查，小型豬LAD血管內(nèi)膜增生變厚，內(nèi)部可見豐富的泡沫細胞，并有粥樣硬化改變，部分變性、壞死的心肌出現(xiàn)心肌纖維化增生。 1.6LAD內(nèi)注入自體血栓法制備小型豬心肌缺血模型的研究1.6.1方法實驗選用小型豬，耳靜脈注射戊巴比妥鈉麻醉后，分離右側(cè)頸總動脈，置入6F動脈鞘管，以Launcher6F右冠導引導管置于左冠狀動脈開口行左冠狀動脈造影，經(jīng)導管注入0.

11、5ml血栓。 1.6.2結(jié)果小型豬LAD注入自體血栓6天后，冠狀動脈造影顯示小型豬LAD幾乎完全堵塞，以定量組織學N-BT染色法顯示心肌缺血范圍，小型豬心肌出現(xiàn)蒼白梗死灶，經(jīng)病理組織學檢查，心肌缺血小型豬心肌出現(xiàn)空泡樣變性壞死，肉芽組織增生，心肌間炎性細胞浸潤，出現(xiàn)瘢痕樣纖維組織增生。 2雙參寧心膠囊對小型豬自體血栓性心肌缺血模型干預(yù)作用的研究2.1方法和結(jié)果2.1.1造模及分組模型制備方法同前。術(shù)后將合格動物分為四組：

12、(1)模型對照組，n=6；(2)陽性對照藥合心爽組，n=6；(3)雙參寧心膠囊16mg/kg劑量組，n=6；(4)雙參寧心膠囊8mg/kg劑量組，n=6?？诜o藥6天后結(jié)束實驗。 2.1.2結(jié)果(1)冠狀動脈造影造模6d后，心肌缺血小型豬冠狀動脈LAD基本栓塞，雙參給藥6天后可明顯減輕心肌缺血小型豬冠狀動脈LAD自體血栓栓塞的程度。 (2)體表胸外心電圖造模6天后，心肌缺血小型豬體表心動圖ST段明顯抬高，出現(xiàn)大范圍的心肌

13、缺血心電圖改變，心肌缺血程度、ST段變化百分率和心肌缺血范圍均增加，雙參明顯具有減輕心肌缺血小型豬心肌缺血程度、ST段變化百分率和心肌缺血范圍的作用。 (3)無創(chuàng)血流動力學造模6天后，心肌缺血小型豬CO、CI、LCW和LCWI明顯降低，PEP明顯升高，雙參可明顯增加心肌缺血小型豬CO、CI、LCW和LCWI，降低SVR和SVRI。 (4)M-型及二維超聲心動圖和組織多普勒成像(DTI)造模給藥6天后行超聲檢查，心肌缺血小

14、型豬心臟室壁變薄，心腔擴大，室壁運動減弱，雙參可明顯降低心肌缺血小型豬LVIDd、LVIDs、ESV和EDV，增加左心收縮功能指標EF，降低IVRT，增加左室前壁心尖段的室壁運動速度和組織追蹤距離。 (5)生化雙參可明顯增加心肌缺血小型豬血漿SOD活性，降低血漿MDA含量。 (6)定量和病理組織學以定量組織學N-BT染色法顯示心肌缺血范圍，心肌缺血小型豬心肌出現(xiàn)大范圍蒼白梗死灶，雙參可明顯降低心肌缺血小型豬心肌缺血區(qū)面積

15、，還可顯著降低缺血區(qū)/心臟百分率和缺血區(qū)/心室百分率。病理組織學檢查可見心肌缺血小型豬心肌變性、壞死，缺失區(qū)被纖維組織替代填充，在壞死的心肌纖維之間及心肌纖維與肉芽組織交界區(qū)見大量嗜中性粒細胞浸潤，血管腔充滿血栓，雙參可使心肌缺血小型豬心肌變性和壞死明顯減輕，但仍可見心肌組織缺失，被肉芽組織替代，部分心肌組織間見嗜中性粒細胞浸潤。 3結(jié)論本課題應(yīng)用C型臂X光機，采用介入技術(shù)，探索了多種方法制備小型豬心肌缺血模型，最終應(yīng)用LAD注

16、入自體血栓的方法首次成功制備了小型豬心肌缺血模型，建立包括冠狀動脈造影、30點體表心電圖、無創(chuàng)血流動力學、常規(guī)超聲測量、心肌組織多普勒分析、生化、心臟定量組織學和病理組織形態(tài)學等一系列綜合評價心肌缺血模型的指標。 該心肌缺血模型更加貼近冠心病的臨床病理生理過程，應(yīng)用此模型可以觀察抗心肌缺血藥的藥效和機理。由于血管栓塞后在藥物作用下，血管還可再通，因此應(yīng)用此模型還可以觀察溶栓藥的藥效和作用特點。該模型比較符合中藥的作用特點，可對心