Nicastrin與THAP7的相互作用.pdf

1、阿爾茨海默氏病(Alzheimer's disease，AD)是一種漸進(jìn)性神經(jīng)退行性疾病，在AD患者腦內(nèi)有兩個(gè)明顯的組織病理學(xué)特征：即細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)(Neurofibrillary Tangle，NFT)和細(xì)胞外的淀粉樣斑(Senile Plaque，SP)。SPs中含有大量的β-淀粉樣蛋白(beta-Amyloid protein，Aβ)。Aβ是淀粉樣前體蛋白(APP)經(jīng)過β-和γ-分泌酶連續(xù)切割產(chǎn)生的，而Nicastrin(N

2、CT)是γ-分泌酶復(fù)合體的重要組成成分之一。最近的研究表明它在γ-分泌酶的組裝和成熟中扮演重要的角色，它調(diào)節(jié)γ-分泌酶復(fù)合體其他組分的穩(wěn)定、轉(zhuǎn)運(yùn)等過程，同時(shí)它作為γ-分泌酶底物結(jié)合位點(diǎn)，賦予了γ-分泌酶廣泛的底物特異性。 為了進(jìn)一步認(rèn)識(shí)和了解NCT的生物學(xué)功能，以及它在阿爾茨海默癥發(fā)病過程中的作用，我們實(shí)驗(yàn)室以NCT蛋白胞內(nèi)端的686-709氨基酸為誘餌蛋白，通過酵母雙雜交方法在人胎腦cDNA文庫進(jìn)行篩選，鑒定出一個(gè)在酵母中能夠

3、與NCT相互作用的蛋白，THAP7，其具有能夠與染色質(zhì)和組蛋白相結(jié)合，抑制基因轉(zhuǎn)錄的作用。 在本課題中我們通過GST pull-down試驗(yàn)和免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)NCT和THAP7在體外和哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)都能發(fā)生相互作用。在293swedish細(xì)胞中過度表達(dá)THAP7能夠使NCT的mRNA水平降低，但卻引起NCT和γ-分泌酶其它組分的蛋白水平增加。而過度表達(dá)THAP7也可以使Aβ和sAPPα分泌都增加，同時(shí)使APP CTFs水平增加