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文檔簡介
1、目的:
通過觀察卡介苗(BCG)對哮喘兒童外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)來源的樹突狀細(xì)胞(Dendritic cell,DC)的表面標(biāo)志、刺激淋巴細(xì)胞增殖功能及分泌細(xì)胞因子的影響,并與變應(yīng)原特異性免疫治療(ASIT)作比較,分析BCG對哮喘患兒PBMC來源的DC成熟及免疫功能的影響。
方法:
采集哮喘急性發(fā)作期患兒靜脈血,隨機(jī)
2、分為BCG干預(yù)組和哮喘組,并采集ASIT治療后的哮喘患兒和正常兒童的靜脈血作為ASIT對照組和正常對照組,分離出外周血單個核細(xì)胞(PBMCs),貼壁培養(yǎng)獲得外周血單核細(xì)胞(peripheral blood monocytes,PB-Mon),rhGM-CSF、rhIL-4聯(lián)合誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化生成未成熟樹突狀細(xì)胞,培養(yǎng)第6天開始加入TNF-α誘導(dǎo)成熟,BCG干預(yù)組在培養(yǎng)的第7天加入BCG刺激,在倒置顯微鏡下連續(xù)觀察DC的形態(tài)學(xué)變化,通過收
3、集培養(yǎng)第9天DCs,流式細(xì)胞術(shù)檢測DCs表面標(biāo)志物HLA-DR、CD80、CD83、CD86及CD1a的表達(dá)率,MTT法檢測DCs刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖的能力,ELISA法測定DC培養(yǎng)上清中IL-10、IL-12的分泌水平,分析BCG在體外對哮喘患兒外周血單個核細(xì)胞來源的DC成熟程度及免疫功能的影響。
結(jié)果:
(1)PBMCs貼壁培養(yǎng)獲得的外周血單核細(xì)胞在rhGM-CSF、rhlL-4、rhTNF-α協(xié)同誘
4、導(dǎo)作用下,分化成為形態(tài)上具有典型樹突狀突起的DCs;(2)正常對照組、BCG干預(yù)組和ASIT對照組DCs表達(dá)CD80、CD83水平均高于哮喘組(P均<0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義,而正常對照組、BCG干預(yù)組、ASIT對照組之間兩兩比較,CD80、CD83表達(dá)水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);CD1a、HLA-DR和CD86的表達(dá)水平四組之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05);(3)正常對照組、BCG干預(yù)組和ASIT對照組DCs分泌
5、IL-12水平均高于哮喘組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05),正常對照組IL-12水平高于BCG干預(yù)組和ASIT對照組(P<0.05),而BCG干預(yù)組和ASIT對照組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);哮喘組、BCG干預(yù)組和ASIT對照組DCs分泌IL-10水平均高于正常對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05),ASIT對照組低于哮喘組和BCG干預(yù)組(P<0.05),而哮喘組與BCG干預(yù)組比較差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);(4)
6、BCG干預(yù)組、哮喘組及ASIT對照組DC刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖增殖倍數(shù)高于正常對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),而BCG干預(yù)組、哮喘組、ASIT對照組兩兩比較的差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
結(jié)論:
1、BCG可影響哮喘患兒PBMC來源DCs的成熟狀態(tài)。
2、BCG可提高哮喘患兒PBMC來源的DCs表面CD80表達(dá),上調(diào)IL-12分泌水平,促進(jìn)Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化,從而調(diào)節(jié)T
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