維生素K2對(duì)人肝細(xì)胞肝癌表達(dá)脫-γ-羧基凝血酶原（Des-γ-carboxy-prothrombin，DCP）抑制作用觀察.pdf

1、目的：脫-γ-羧基凝血酶原(DCP)是肝細(xì)胞肝癌產(chǎn)生的異常凝血酶原，其機(jī)制可能與肝癌細(xì)胞缺乏或?qū)S生素K利用障礙，造成依賴維生素K的γ谷氨酰羧化酶及輔酶活性降低，導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)產(chǎn)生的凝血酶原N端10個(gè)谷氨酸殘基羧化不全致DCP大量產(chǎn)生并分泌至血液中。我們認(rèn)為，DCP不但可以作為肝細(xì)胞癌(HCC)診斷的標(biāo)志物，更重要的作用在于其可能具有刺激肝癌細(xì)胞增殖作用。所以，抑制肝癌細(xì)胞DCP的產(chǎn)生和降低血液中含量，可能達(dá)到抑制DCP對(duì)肝癌細(xì)胞的進(jìn)一步刺

2、激增殖作用，達(dá)到輔助治療肝癌的目的。維生素K類藥物及其衍生物被發(fā)現(xiàn)可能具有一定的抑制肝癌細(xì)胞產(chǎn)生DCP作用，降低血液DCP水平，有效抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)，改善臨床癥狀，作用機(jī)制可能與其促進(jìn)肝癌細(xì)胞γ谷氨酰羧化酶活性有關(guān)。本研究通過實(shí)驗(yàn)觀察了維生素K2對(duì)肝細(xì)胞肝癌的抑制作用，證實(shí)了其與降低DCP表達(dá)之間的相關(guān)性。 方法：體外實(shí)驗(yàn)，以MTT法檢測(cè)了VitK2對(duì)人肝癌細(xì)胞(HCC)生長(zhǎng)抑制作用，以集落形成法測(cè)定VitK2對(duì)長(zhǎng)時(shí)間接觸腫瘤細(xì)

3、胞克隆原細(xì)胞的抑制活性。以Transwell小室模型方法觀察了VitK2對(duì)HCC細(xì)胞體外侵襲能力的抑制作用。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，以裸鼠接種人肝癌細(xì)胞，灌胃給予VitK2，觀察其對(duì)HCC細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。DCP表達(dá)水平檢測(cè)方法，以ELISA法檢測(cè)體外培養(yǎng)細(xì)胞上清液和動(dòng)物血液DCP水平；以Westernblot和免疫組織化學(xué)法分析HCC細(xì)胞DCP表達(dá)狀態(tài)。 結(jié)果：體外結(jié)果顯示，不同劑量VitK2與HCC細(xì)胞孵育不同時(shí)間，VitK2對(duì)HCC增

4、殖具有一定的生長(zhǎng)抑制作用，并呈現(xiàn)劑量和接觸時(shí)間依賴性關(guān)系。VitK2具有明顯抑制HCC細(xì)胞侵襲和穿過Matrigel的能力，其對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制增殖作用在裸鼠移植HCC細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中得到證實(shí)。在研究VitK2抑制HCC細(xì)胞增殖與DCP表達(dá)水平相關(guān)性方面，VitK2(2-40μM)明顯降低HCC細(xì)胞培養(yǎng)上清液中。DCP表達(dá)水平，對(duì)HCC生長(zhǎng)抑制作用和DCP水平下降呈現(xiàn)相關(guān)性，這種作用在裸鼠移植人肝癌細(xì)胞表達(dá)DCP及VitK2治療實(shí)驗(yàn)中得到證實(shí)。