非病灶性難治性顳葉癲癇的相關(guān)基因研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文非病灶性難治性顳葉癲癇的相關(guān)基因研究姓名：吳洵昳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：洪震20040430復(fù)旦大學(xué)博士研究生學(xué)位論文中文摘要非病灶性難治性顳葉癲癇的相關(guān)基因研究中文摘要本課題的目的在于從非病灶性顳葉癲癇入手，篩選顳葉癲癇相關(guān)基因表達(dá)譜，并通過(guò)對(duì)表達(dá)譜篩選所發(fā)現(xiàn)的差異目標(biāo)基因進(jìn)行驗(yàn)證，從分子水平探究非病灶性顳葉癲癇可能的發(fā)病機(jī)制，以期為難治性颥葉癲癇的診斷與治療開(kāi)辟新途徑。第一部分應(yīng)用新興的分子生物

2、學(xué)技術(shù)——cDNA微列陣技術(shù)，利用含有18000個(gè)cDNA克隆的微列陣對(duì)難治性非病灶性顳葉癲癇患者手術(shù)切除顳葉組織標(biāo)本與對(duì)照間行基因表達(dá)譜分析研究；結(jié)果顯示：兩份顳葉癲癇樣品中表達(dá)趨勢(shì)一致的已知基因主要包括：免疫相關(guān)因子、離子通道相關(guān)因子、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因、細(xì)胞增殖周期因子、細(xì)胞凋亡相關(guān)基因等，在顳葉癲癇發(fā)生發(fā)展各個(gè)階段均有基因的參與，是一個(gè)復(fù)雜的調(diào)控過(guò)程。第二部分應(yīng)用半定量RTPCR方法，根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)所獲得的結(jié)論，檢測(cè)12例非病灶性難

3、治性顳葉癲癇患者和10例對(duì)照顳葉組織中編碼內(nèi)向整流鉀離子通道kir23亞家族的KCNJ4mRNA表達(dá)水平的差異；結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與對(duì)照組相比，顳葉癲癇組KCNJ4mRNA表達(dá)水平明顯降低，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO05)。第三部分應(yīng)用免疫組化以及Westernblot方法，分析了KCNJ4基因所編碼的內(nèi)向整流鉀通道kir23蛋白在非病灶性難治性顳葉癲癇患者與對(duì)照腦組織中的表達(dá)差異，結(jié)果顯示：kir23通道蛋白在顳葉癲癇患者顳葉組織中的表達(dá)水

4、平明顯低于對(duì)照組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO05)。綜合上述結(jié)果，我們推測(cè)，KCNJ4基因表達(dá)水平的異?？赡苁蛊渚幋a的內(nèi)向整流鉀離子通道kir23亞家族的蛋白表達(dá)水平下調(diào)，從而干擾了神經(jīng)細(xì)胞膜的穩(wěn)定性、同時(shí)使得膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)過(guò)度鉀離子負(fù)荷的緩沖能力下降；內(nèi)向整流鉀通道表達(dá)水平的變化，可能影響了其維持細(xì)胞興奮性平衡作用，最終導(dǎo)致癇樣放電的發(fā)生。由此，我們進(jìn)一步推測(cè)，kir23通道亞家族可能是一個(gè)抗癲癇藥物的新的理想作用位點(diǎn)。關(guān)鍵詞：非病灶性難