TRPV1在藥物難治性顳葉內(nèi)側(cè)癲癇中的表達(dá)及作用研究.pdf

1、顳葉內(nèi)側(cè)癲癇(Mesial temporal lobe epilepsy,MTLE)為成人藥物難治性癲癇的最常見類型,以起源于顳葉內(nèi)側(cè)結(jié)構(gòu)(通常為海馬)自發(fā)、反復(fù)且進(jìn)行性加重的癲癇發(fā)作為臨床特征。主要的病理學(xué)改變?yōu)楹ｑR硬化,具體表現(xiàn)為海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)以及齒狀回區(qū)大量神經(jīng)元的丟失,膠質(zhì)增生,苔蘚纖維出芽和廣泛的突觸重塑。大多數(shù)顳葉內(nèi)側(cè)癲癇都會發(fā)展成為藥物難治性癲癇,而只能通過手術(shù)切除致癇灶來控制癲癇發(fā)作。目前對顳葉內(nèi)側(cè)癲癇的病理發(fā)生

2、機制的認(rèn)識尚無明確定論,一些研究表明離子通道可能在其發(fā)生和發(fā)展的過程中發(fā)揮了重要作用。
　　迄今為止,絕大多數(shù)對MTLE病理發(fā)生機制的研究都把重點放在了選擇性離子通道的作用上,而對非選擇性離子通道的作用關(guān)注甚少。瞬時感受器電位辣椒素受體Ⅰ型(Transient receptor potential vanilloid type-1,TRPV1)便是一種配體門控的非選擇性陽離子通道,其對多種陽離子通透,包括鈣、鈉、鎂等。TRPV1能

3、被多種傷害性刺激所激活,包括辣椒素、高熱以及疼痛等。此外,TRPV1還能被鈣調(diào)素依賴激酶II,N–糖基化以及神經(jīng)生長因子(Nerve growth factor,NGF)所調(diào)節(jié)和敏化。TRPV1廣泛表達(dá)于外周感覺神經(jīng)元上,同時也表達(dá)于嚙齒動物的許多腦區(qū)中,包括所有的皮質(zhì)區(qū),部分邊緣系統(tǒng)(海馬,中央杏仁核),藍(lán)斑,下丘腦,以及黑質(zhì)。然而在人腦中,TRPV1在上述相應(yīng)腦區(qū)的表達(dá)分布和具體作用尚不明確。隨著人們對TRPV1認(rèn)識的加深,大量研究

4、表明TRPV1參與了許多重要的生理和病理過程,諸如神經(jīng)遞質(zhì)的釋放,突觸重塑及神經(jīng)元的死亡,并且還可能具有調(diào)節(jié)神經(jīng)元和神經(jīng)環(huán)路興奮性的作用。此外,有研究表明TRPV1還參與了包括精神分裂癥,中風(fēng)以及帕金森氏病在內(nèi)的許多神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理生理過程。
　　動物實驗研究表明TRPV1與癲癇發(fā)生密切相關(guān)。Bhaskaran等的研究顯示,在匹魯卡品誘導(dǎo)的小鼠顳葉癲癇(Temporal lobe epilepsy,TLE)模型中,TRPV1的蛋

5、白水平在癲癇鼠的齒狀回區(qū)明顯升高;該研究還表明,大麻素激動劑之一Anandamide(AEA),能夠通過激活TRPV1而增加TLE小鼠突觸重塑后的齒狀回區(qū)的興奮性回路的電活動。此外,我們之前的研究也顯示TRPV1的蛋白表達(dá)水平在結(jié)節(jié)性硬化(Tuberous sclerosis complex,TSC)與局灶性皮質(zhì)發(fā)育不良IIb型(Focal cortical dysplasia type IIb,FCDIIb)的病灶組織中是增高的,而T

6、SC和FCDIIb已被證實是小兒藥物難治性癲癇的重要病因。然而,TRPV1與人MTLE發(fā)病機制之間的相關(guān)性尚未見報道。本研究中,我們通過研究TRPV1及其致敏因子NGF在MTLE病人手術(shù)切除的致癇灶組織中的表達(dá)和細(xì)胞定位,來闡明TRPV1在MTLE發(fā)生機制中可能的作用。研究結(jié)果如下:
　　一、TRPV1在MTLE手術(shù)標(biāo)本中的表達(dá)及細(xì)胞定位
　　1.通過RT-PCR和Western blot,從基因和蛋白水平證實,TRPV1表

7、達(dá)于正常的顳葉皮層和海馬。免疫組化結(jié)果顯示,TRPV1主要表達(dá)于神經(jīng)元的胞體和樹突上。
　　2.在MTLE中,我們發(fā)現(xiàn)TRPV1的mRNA及蛋白水平明顯高于對照組。免疫組化結(jié)果顯示,TRPV1強表達(dá)于MTLE的顳葉皮層和海馬的部分區(qū)域(CA1,CA3和齒狀回),弱或中等強度的表達(dá)于正常對照組。在空白對照組中未見TRPV1的陽性反應(yīng)。
　　3.免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示:①在MTLE的顳葉皮層中,TRPV1與神經(jīng)元的標(biāo)志物NeuN共

8、表達(dá),以及少量的星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物GFAP共表達(dá),但不與小膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物HLA共定位。此外,TRPV1還與興奮性神經(jīng)元的標(biāo)志物Glutamate以及抑制性神經(jīng)元的標(biāo)志物GABA共表達(dá),提示TRPV1同時表達(dá)于興奮性神經(jīng)元和抑制性神經(jīng)元上。②在MTLE的海馬的CA1,CA3和齒狀回區(qū),TRPV1的細(xì)胞定位模式與其在顳葉皮層中的表達(dá)模式類似。
　　二、NGF在MTLE手術(shù)標(biāo)本中的表達(dá)
　　1.本實驗中,我們還運用免疫組化的方

9、法研究了TRPV1的致敏劑之一NGF在MTLE中的表達(dá)。結(jié)果顯示,在正常對照的顳葉皮層和海馬的CA1,CA3和齒狀回中,NGF顯示弱或中等強度的表達(dá),但在MTLE中的相應(yīng)區(qū)域,TRPV1則顯示出強陽性表達(dá)。在空白對照組中,NGF未表現(xiàn)出陽性反應(yīng)。
　　綜上所述,本研究結(jié)果顯示,TRPV1在MTLE病灶組織中的mRNA及蛋白表達(dá)水平明顯增高。免疫組化和免疫熒光結(jié)果表明,TRPV1主要表達(dá)在神經(jīng)元的胞體和樹突以及部分星形膠質(zhì)細(xì)胞的終足