三七有效成分對人子宮內(nèi)膜細胞炎癥反應(yīng)的作用.pdf

1、本課題建立了由細菌脂多糖誘導(dǎo)的人子宮內(nèi)膜細胞的炎癥模型，并通過細胞毒實驗(MTT法)觀察了三七有效成分及對照藥宮血寧膠囊作用于人子宮內(nèi)膜細胞的細胞毒作用，確定了三七有效成分及對照藥宮血寧膠囊干預(yù)子宮內(nèi)膜細胞的最佳濃度(三七皂苷12.5m咖1+三七氨酸3.13mg/ml；宮血寧5mg／ml)，并從NF-KB、TNF-α、IL-1三個方面觀察三七有效成分對人子宮內(nèi)膜細胞炎癥反應(yīng)的作用。結(jié)果顯示： l、人子宮內(nèi)膜細胞的炎癥模型的建立

2、 目的：建立通過細菌脂多糖誘導(dǎo)人子宮內(nèi)膜細胞產(chǎn)生炎癥模型的方法。 方法：采用5個梯度濃度的大腸桿菌型細菌脂多糖(LPS)作用子宮內(nèi)膜細胞，通過MTT法確定對子宮內(nèi)膜細胞生長的抑制率(IR)≤10％濃度作為造模濃度。以此濃度干預(yù)子宮內(nèi)膜細胞，觀察正常對照組，48h模型組，72h模型組的子宮內(nèi)膜細胞的白細胞介素1β(IL-lβ)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的分泌變化情況。 結(jié)果：符合IR≤lO％的細菌脂多糖濃度為1

3、00ng/ml。以此濃度干預(yù)48h及72h模型組的子宮內(nèi)膜細胞的IL-1β和TNF-α的濃度明顯高于同時段正常對照組，說明造模成功。 結(jié)論：100ng/ml可為LPS誘導(dǎo)人子宮內(nèi)膜細胞產(chǎn)生炎癥模型的最佳濃度。 2、三七有效成分、對照藥宮血寧膠囊的劑量確定篩選實驗 目的：篩選三七有效成分、對照藥宮血寧膠囊作用于人子宮內(nèi)膜細胞的最佳濃度。 方法：通過MTT法確定對子宮內(nèi)膜細胞的抑制率(IR)≤10％的濃度作為

4、后續(xù)實驗的干預(yù)濃度。 結(jié)果：符合IR≤10％的三七有效成分的濃度為三七皂苷12.5mg/ml+三七氨酸3.13mg/ml；對照藥宮血寧膠囊的濃度為5mg/ml。 結(jié)論：三七皂苷12.5mg/ml+三七氨酸3.13mg/ml；宮血寧5mg/ml可作為后續(xù)實驗中三七有效成分、對照藥宮血寧膠囊干預(yù)子宮內(nèi)膜細胞的最佳濃度。 3、三七有效成分對子宮內(nèi)膜細胞炎癥NF-KB活性及TNF-α、IL-ImRNA表達的干預(yù)作用

5、 目的：探討NF-KB及TNF-α、IL-1在炎性子宮出血中的作用及三七有效成分的干預(yù)作用。 方法：電泳遷移率改變分析法(EMSA)檢測子宮內(nèi)膜細胞NF-KB與靶基因DNA的結(jié)合活性；用RT-PCR法檢查子宮內(nèi)膜細胞TNF-α、IL-1mRNA的表達。 結(jié)果：與模型組及宮血寧對照組相比，三七有效成分可明顯降低NF-KB活性及TNF-α、IL-1mRNA表達，具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義；與正常組相比無顯著性差別。 結(jié)論