宮環(huán)止血片對人子宮內(nèi)膜細(xì)胞影響的分子機(jī)制研究.pdf

1、本課題建立了由細(xì)菌脂多糖誘導(dǎo)的人子宮內(nèi)膜細(xì)胞的炎癥模型，并通過細(xì)胞毒實驗(MTT法)觀察了宮環(huán)止血片及對照藥吲哚美辛作用于人子宮內(nèi)膜細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，確定了宮環(huán)止血片及對照藥吲哚美辛干預(yù)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的最佳濃度(含藥血清20％)，并從MMP-1、TIMP-1的mRNA檢測方面分析觀察宮環(huán)止血片對人子宮內(nèi)膜細(xì)胞炎癥模型的作用。 結(jié)果顯示： 1、人子宮內(nèi)膜細(xì)胞的炎癥模型的建立 目的：建立通過細(xì)菌脂多糖誘導(dǎo)人子宮內(nèi)膜細(xì)胞

2、產(chǎn)生炎癥模型的方法。方法：采用5個梯度濃度的大腸桿菌型細(xì)菌脂多糖(LPS)作用子宮內(nèi)膜細(xì)胞，通過MTT法確定對子宮內(nèi)膜細(xì)胞生長的抑制率(IR)≤10％濃度作為造模濃度。觀察MMP-1的變化情況。結(jié)果：符合IR≤10％的細(xì)菌脂多糖濃度為100μg/ml。以此濃度子宮內(nèi)膜細(xì)胞的MMP-1的濃度明顯高于同時段正常對照組，說明造模成功。結(jié)論：100μg/ml可為LPS誘導(dǎo)人子宮內(nèi)膜細(xì)胞產(chǎn)生炎癥模型的最佳濃度。 2、宮環(huán)止血片、對照藥吲哚

3、美辛的劑量確定篩選實驗 目的：篩選宮環(huán)止血片、對照藥吲哚美辛作用于人子宮內(nèi)膜細(xì)胞的最佳濃度。方法：通過MTT法確定對子宮內(nèi)膜細(xì)胞的抑制率(IR)≤10％的濃度作為后續(xù)實驗的干預(yù)濃度。結(jié)果：符合IR≤10％的宮環(huán)止血片與對照藥吲哚美辛含藥血清濃度均為20％。結(jié)論：宮環(huán)止血片含藥血清濃度20％可作為后續(xù)實驗中干預(yù)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的最佳濃度。 3、宮環(huán)止血片對子宮內(nèi)膜細(xì)胞炎癥MMP-1、TIMP-1mRNA表達(dá)的干預(yù)作用

4、 目的：探討MMP-1、TIMP-1在炎性子宮出血中的作用及宮環(huán)止血片干預(yù)作用。方法：電泳遷移率改變分析法(EMSA)檢測子宮內(nèi)膜細(xì)胞MMP-1與靶基因DNA的結(jié)合活性；用RT-PCR法檢查子宮內(nèi)膜細(xì)胞MMP-1的表達(dá)。結(jié)果：與吲哚美辛對照組相比，宮環(huán)止血片可明顯降低MMP-1mRNA的表達(dá)，增強(qiáng)TIMP-1mRNA的表達(dá)，具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01。結(jié)論：MMP-1表達(dá)增強(qiáng)可能間接參與了炎性子宮出血的發(fā)病機(jī)制，宮環(huán)止血片具有抑