土家藥刺老苞根皮干預骨折愈合機制研究.pdf

1、目的:
　　 運用土家藥刺老苞根皮水煎劑對SD大鼠脛骨定位打孔骨折模型進行干預，通過組織病理學、X-ray影像學、生物力學、骨密度、血清及骨生化學、分子生物學（血管內皮生長因子1、2蛋白表達）等技術較綜合地評價其干預骨折愈合的療效，并就其調控骨折愈合的機制作一初步的探索。
　　 方法:
　　 建立大鼠脛骨骨折模型后，隨機分為模型組、刺老苞根皮高劑量組（以下簡稱高劑組）、刺老苞根皮中劑量組（以下簡稱中劑組）、刺老苞

2、根皮低劑量組（以下簡稱低劑組）、傷科接骨片組（以下簡稱中藥組）及左旋多巴組（以下簡稱西藥組），另設空白對照組（以下簡稱空白組），每組50只。按照骨折愈合分期要求，各組再按觀測時間點隨機分成5個小組，每組10只，分別為4天組、7天組、14天組、21天組、28天組。除正常組和模型組灌服蒸餾水外，其他各組依次灌服:刺老苞根皮水煎劑高劑量、中劑量、低劑量、傷科接骨片混懸液、左旋多巴片混懸液。在各時間點末，處死，取血取材。依次通過HE染色和X-r

3、ay片觀察組織形態(tài)學變化;ICP-MS檢測骨礦物質元素;三點彎曲法測試右側脛骨的生物力學;骨密度儀檢測骨痂處骨密度;血清中堿性磷酸酶(ALP)活性、骨鈣素(BGP)和羥脯氨酸(HYP)含量及骨總膠原蛋白含量測定;免疫組化技術檢測Flt-1、Flk-1蛋白表達等相關試驗。
　　 結果:
　　 1.組織形態(tài)學:骨折4天后，打孔邊緣清晰;7天后，骨折部位形成成熟骨小梁;14天后打孔邊緣不慎清晰;21天后打孔邊緣模糊;28天后打

4、孔邊緣幾近消失。刺老苞根皮不同劑量組骨組織愈合較模型組快，以高、中劑量組更為顯著。修復速度與對照組相近。
　　 2.骨礦物元素指標:刺老苞根皮不同劑量組骨微量元素鈣、磷、鎂、銅、硒、錳含量均高于模型組，以高、中劑量組更為顯著的（與對照組及模型組比較:P＜0.01）。
　　 3.血清生化及骨生化指標:刺老苞根皮不同劑量組與模型組比較，4天時無明顯差異;7天～28天時，血清堿性磷酸酶活性升高，血清骨鈣素、羥脯氨酸含量增加，骨

5、總膠原蛋白含量增加，以高、中劑量組更為顯著（與對照組及模型組比較:P＜0.01）。
　　 4.免疫組化結果:4天時，骨痂處Flt-1和Flk-1表達較少，各給藥組與模型組相比有差異(P＜0.01，P＜0.05);7天～28天，骨痂處Flt-1和Flk-1表達增強，以7天時最強，各給藥組與模型組相比有差異(P＜0.01，P＜0.05);刺老苞根皮不同劑量組表達較其他各組強。
　　 5.骨生物力學指標:脛骨結構力學和材料力學

6、參數(shù):撓度、載荷、應力、應變等參數(shù)，模型組與空白組比，差異顯著(P＜0.01)。各給藥組與模型組比，差異顯著(P＜0.01)。
　　 6.骨密度:骨折后4天、各組BMD值無顯著差異(P＞0.05)，7天、14天時高劑量組BMD值高于模型組(P＜0.01)，21天時，刺老苞根皮不同劑量組BMD值均高于模型組(P＜0.01)。28天時，各組BMD值無明顯差異(P＞0.05)。
　　 結論:
　　 1.刺老苞根皮在骨愈

7、合過程中能刺激骨生成細胞增殖分化，縮短骨痂形成時間，使骨修復提前進入重建期。
　　 2.刺老苞根皮在骨愈合過程中提高血清堿性磷酸酶活性及骨鈣素、羥脯氨酸的含量，加速骨基質礦化，同時可增強骨總膠原蛋白含量。
　　 3.刺老苞根皮在骨愈合過程中不同程度的提高了骨缺損處Flt-1、Flk-1蛋白及mRNA的表達，加快骨愈合速度。這可能是刺老苞根皮促進骨折愈合的分子機制之一。
　　 4.刺老苞根皮在骨愈合過程中補充骨修復