奈韋拉平對(duì)甲狀腺未分化癌細(xì)胞增殖分化及碘攝取能力的影響.pdf

1、目的：
　　由于甲狀腺未分化癌細(xì)胞的惡性程度高、細(xì)胞增殖快,甲狀腺未分化癌確診時(shí)往往已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移,手術(shù)、放療及化療等常規(guī)治療方法效果多不理想。高分化的甲狀腺癌攝碘能力尚可,所以,可以用放射性碘治療殺死原發(fā)或轉(zhuǎn)移部位的腫瘤,但對(duì)于甲狀腺未分化癌來說卻不能用放射性碘治療,因?yàn)?甲狀腺未分化癌細(xì)胞內(nèi)鈉/碘同向轉(zhuǎn)運(yùn)體(NIS)、甲狀腺過氧化物酶(TPO)、甲狀腺球蛋白(TG)、促甲狀腺激素受體(TSHR)等甲狀腺特異性基因的表達(dá)減少甚至缺

2、失,尤其是NIS表達(dá)減少,導(dǎo)致甲狀腺未分化癌細(xì)胞無法攝取放射性碘,使其不適于放射性碘治療,其治療十分棘手。
　　內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)基因在體內(nèi)主要由逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子及內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒兩種重復(fù)序列編碼,參與各種病理生理過程。在高分化組織中,逆轉(zhuǎn)錄酶的表達(dá)量較低,而在細(xì)菌細(xì)胞、胚胎組織、未分化及變異細(xì)胞中其表達(dá)量較高,這暗示逆轉(zhuǎn)錄酶與細(xì)胞潛在的增殖分化能力可能存在著直接的聯(lián)系。逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑對(duì)體內(nèi)逆轉(zhuǎn)錄酶的活性具有抑制作用,并可以抑制細(xì)

3、胞增殖,誘導(dǎo)分化。
　　基于以上理論,本研究旨在通過奈韋拉平(一種非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑)誘導(dǎo)甲狀腺未分化癌FRO細(xì)胞,觀察其對(duì)FRO細(xì)胞增殖及細(xì)胞內(nèi)NIS等甲狀腺特異性基因表達(dá)的影響,并進(jìn)行細(xì)胞攝碘能力的測(cè)定,比較藥物誘導(dǎo)前后碘攝取的變化,探討奈韋拉平能否抑制甲狀腺未分化癌細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)分化及誘導(dǎo)細(xì)胞攝取放射性碘,試圖尋找一種能使甲狀腺未分化癌細(xì)胞攝取碘的藥物,以便用碘治療殺滅甲狀腺未分化癌細(xì)胞。
　　方法：
　　1

4、.細(xì)胞增殖抑制率檢測(cè)實(shí)驗(yàn):MTT法檢測(cè)不同濃度奈韋拉平(O,100,200,350,500umol/L)對(duì)FRO細(xì)胞的增殖抑制作用;
　　2.細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)奈韋拉平對(duì)細(xì)胞增殖抑制的可逆性;
　　3.Hoechst33258染色檢測(cè)不同濃度奈韋拉平(O,200,350,500umol/L)誘導(dǎo)后FRO細(xì)胞的凋亡情況,臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)奈韋拉平(O,200,350,500umol/L)對(duì)FRO細(xì)胞的毒性作用;
　　4.倒置相差顯

5、微鏡照相觀察奈韋拉平誘導(dǎo)后FRO細(xì)胞表型變化;
　　5.real.time PCR檢測(cè)奈韋拉平誘導(dǎo)后FRO細(xì)胞和甲狀腺乳頭狀癌BHP細(xì)胞中NISmRNA和TSHRmRNA的表達(dá):
　　6.普通RT-PCR和real.time PCR檢測(cè)加入TSH后FRO細(xì)胞中NISmRNA的表達(dá):
　　7.放射性碘攝取實(shí)驗(yàn)觀察奈韋拉平誘導(dǎo)前后FRO細(xì)胞攝碘的變化。
　　結(jié)果：
　　1.不同濃度奈韋拉平作用后,FRO細(xì)胞增殖

6、受到抑制,抑制作用隨著藥物濃度增大而增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);
　　2.奈韋拉平所誘導(dǎo)的FRO細(xì)胞增殖抑制具有可逆性;
　　3.在350mmol/L濃度范圍內(nèi)奈韋拉平?jīng)]有引起明顯的細(xì)胞凋亡,對(duì)細(xì)胞沒有產(chǎn)生明顯的毒性作用,大于該濃度時(shí)毒性作用增加;
　　4.奈韋拉平誘導(dǎo)后FRO細(xì)胞表型向分化型細(xì)胞表型發(fā)展;
　　5.奈韋拉平誘導(dǎo)后FRO細(xì)胞中NISmRNA和TSHRmRNA的表達(dá)較對(duì)照組增加,差異有統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)意義(P＜0.01和P＜0.05);奈韋拉平誘導(dǎo)后BHP細(xì)胞中NISmRNA和TSHRmRNA的表達(dá)較對(duì)照組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞O.05);
　　6.奈韋拉平預(yù)處理過的FRO細(xì)胞,在加入TSH后細(xì)胞中NISmRNA的表達(dá)進(jìn)一步增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);
　　7.奈韋拉平誘導(dǎo)前后FRO細(xì)胞放射性計(jì)數(shù)分別為【(5.34±0.93)X103計(jì)數(shù)·min-1/106個(gè)細(xì)胞】和【(6.76±0.60)X103

8、計(jì)數(shù)·min-1/106個(gè)細(xì)胞】,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　奈韋拉平能夠抑制FRO細(xì)胞增殖,且這種對(duì)增殖的抑制作用是可逆的,同時(shí)能夠誘導(dǎo)FRO細(xì)胞表型向分化型細(xì)胞發(fā)展,并誘導(dǎo)FRO細(xì)胞中NISmRNA和TStHRmRNA表達(dá)增加,表明奈韋拉平能夠誘導(dǎo)甲狀腺未分化癌細(xì)胞分化;用奈韋拉平預(yù)處理過的FRO細(xì)胞,在TSH刺激下NISmRNA的表達(dá)進(jìn)一步增加,表明奈韋拉平對(duì)FRO細(xì)胞中TsH/SHR途徑有修復(fù)