乳腺癌中P73α與Erα的相互調(diào)控.pdf

1、目的：探討乳腺癌細胞中ERα與p73α的相互調(diào)控。
　　 方法：感受態(tài)細胞購自與北京Trans Gen公司。用Flag-ERα10ng及Flag-p73α10ng轉(zhuǎn)化入DH5α感受態(tài)細胞，用LB培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)過夜擴增DNA，用天根無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒提取DNA，并進行瓊脂糖膠電泳來檢測所提質(zhì)粒純度，用分光光度計檢測質(zhì)粒濃度。用Flag-ERα及Flag-p73α質(zhì)粒轉(zhuǎn)染乳腺癌MCF-7細胞。本研究的目的在于探測ERα與p73α

2、的相互作用，用DNA及空白載體按以下四組轉(zhuǎn)染MCF-7細胞，四組DNA如下：6.5ug pcDNA3.0；2ug Flag-ERα+4.5ugpcDNA3.0；4.5ug Flag-p73α+2ug pcDNA3.0；2ug Flag-ERα+4.5ug Flag-p73α。MCF-7細胞購自上海中科院細胞庫，用含10％胎牛血清的DMEM進行細胞培養(yǎng)及傳代。當細胞密度達到大約60％時，用lipofection2000轉(zhuǎn)染試劑按照產(chǎn)品說明

3、書進行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。通過加用pcDNA3.0來確保每個盤中轉(zhuǎn)染的總的DNA量相等。細胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后培養(yǎng)18-24小時，去掉培養(yǎng)基，PBS洗三次，加入細胞裂解液用細胞刮子將細胞刮下，放在碎冰上，反復渦旋裂解細胞提取蛋白，并用Bradford法測595nm波長來做出蛋白標準曲線，進行蛋白定量。Western blot法檢測MCF-7中ERα、p73α蛋白的表達。
　　 結果：1.質(zhì)粒提取成功，DNA轉(zhuǎn)染成功，蛋白表達佳。2.ERα及p73