潰結安對大鼠潰瘍性結腸炎模型中NF-κB基因表達的影響及RNAi技術平臺的建立.pdf

1、目的：研究維藥西帕依潰結安對大鼠潰瘍性結腸炎模型NF-кB 基因表達的影響，建立RNAi技術平臺，探討潰瘍性結腸炎發(fā)病的敏感點及維藥西帕依潰結安治療潰瘍性結腸炎的作用靶點。 方法：實驗動物分為正常組，潰瘍性結腸炎模型組，西帕依潰結安干預組，5-氨基水楊酸(5-ASA)陽性對照組，生理鹽水(NS)陰性對照組；采用DNCB和乙酸復合法建立大鼠潰瘍性結腸炎模型；通過半定量RT-PCR分析NF-婦mRNA的表達水平；克隆大鼠NF-кB的

2、完整編碼區(qū)，與pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO載體連接，構建pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-NF-кB真核表達載體；設計針對NF-кB基因的siRNA模板與pSilencer 1.0-U6載體連接，構建pSilencer 1.0-U6-siRNA-NF-кB干擾載體；通過脂質體轉染方法，在COS-7細胞中表達NF-кB-GFP融合蛋白，應用干擾載體進行調節(jié)，經倒置熒光顯微鏡及Westernblot檢測NF-кB-GFP

3、融合蛋白的表達，篩選有效的siRNA。 結果：模型組中大鼠的癥狀、體征、結腸組織大體標本、病理切片均符合潰瘍性結腸炎模型建立的標準；與正常組相比，模型組中NF-кB mRNA表達水平升高；與模型組相比，西帕依潰結安干預組、生理鹽水陰性對照組、5-ASA陽性對照組NF-кB mRNA表達水平均降低，且具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；但西帕依潰結安干預組與生理鹽水陰性對照組之間無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。倒置螢光顯微鏡及Weste