潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織中c-fos表達的變化及西帕依潰結(jié)安免疫保護機制的研究.pdf

1、目的：建立潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis，UC)的大鼠模型，研究UC大鼠結(jié)腸組織中c-fos表達的變化及西帕依潰結(jié)安的免疫保護機制；為應(yīng)用RNA干擾(RNA interference，RNAi)技術(shù)探討UC發(fā)病的敏感點及維藥西帕依潰結(jié)安治療作用靶點，構(gòu)建大鼠c-fos基因的真核表達載體。方法：健康Wistar大鼠分為正常組(n=10)、潰瘍性結(jié)腸炎模型組(n=11)、西帕依潰結(jié)安干預(yù)組(n=14)、5-氨基水楊酸組(

2、陽性對照組，n=14)及生理鹽水組(陰性對照組，n=15)共5組，用2、4-二硝基氯苯(2，4-dinitrochlorobenzene，DNCB)與乙酸復(fù)合法制備大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型。采用RT-PCR和Western blot的方法檢測大鼠結(jié)腸組織中c-fos表達的變化；構(gòu)建pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-c-fos重組質(zhì)粒，鑒定正確后以Lipofectamine 2000介導(dǎo)，將其導(dǎo)入COS-7細胞，倒置熒光顯微鏡觀察，并

3、用Western blot方法驗證其蛋白的表達。結(jié)果：模型組大鼠從體征、癥狀、結(jié)腸粘膜損傷情況、病理切片結(jié)果均提示已成功建立UC大鼠的模型；c-fos表達在蛋白水平上的半定量結(jié)果顯示：UC模型組大鼠c-Fos蛋白的表達與正常組相比明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；經(jīng)治療后西帕依潰結(jié)安干預(yù)組大鼠c-Fos蛋白的表達與UC模型組相比明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；生理鹽水組大鼠c-Fos蛋白的表達高于西帕依潰結(jié)安干

4、預(yù)組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；c-fos表達在mRNA水平上的半定量結(jié)果顯示組間無統(tǒng)計學(xué)意義。經(jīng)PCR和測序鑒定表明，克隆出大鼠結(jié)腸組織c-fos的編碼序列同GeneBank收錄的序列一致，表明真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建正確。以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染COS-7細胞后，用倒置熒光顯微鏡觀察和Western blot檢測表明，細胞可表達融合蛋白。結(jié)論：c-fos表達的變化可能與UC的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)聯(lián)；維藥西帕依潰結(jié)安治療UC的作用可能與其降低了c-