cMPDs患者JAK2 V617F點(diǎn)突變和ETS2 mRNA表達(dá)及其相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：真性紅細(xì)胞增多癥(PV)、原發(fā)性血小板增多癥(ET)和特發(fā)性骨髓纖維化(IMF)組成了經(jīng)典的BCR/ABL陰性的慢性骨髓增殖性疾病(cMPDs)。與BCR/ABL陽性的CML不同，在PV、ET和IMF患者沒有發(fā)現(xiàn)可重復(fù)性染色體易位，也無特效治療藥物。近期的一些研究發(fā)現(xiàn)BCR/ABL陰性的cMPDs患者中廣泛存在一種特異性基因突變：JAK2基因的第1849位點(diǎn)發(fā)生G→T突變，導(dǎo)致JAK2蛋白第617位的纈氨酸被苯丙氨酸代替(簡(jiǎn)稱為J

2、AK2 V617F)。約90％的PV患者存在該突變，并且在其他BCR/ABL陰性的cMPDs患者如ET和IMF中也有相當(dāng)?shù)谋壤?，而在其他血液病中罕見此突變。ETS2(人紅血細(xì)胞增多癥病毒致癌基因同源體2)是ETS轉(zhuǎn)錄因子家族的一員，ETS2基因定位于21號(hào)染色體21q22.3，編碼分子量為56-kDa的蛋白質(zhì)，它在腫瘤發(fā)生、骨骼發(fā)育和免疫應(yīng)答中扮演重要角色。近期有研究表明在BCR/ABL陰性的cMPDs中，JAK2 V617F點(diǎn)突變陽性

3、患者的ETS2 mRNA表達(dá)水平高于陰性者。本研究旨在探討B(tài)CR/ABL陰性的cMPDs中JAK2 V617F點(diǎn)突變的發(fā)生率、ETS2 mRNA表達(dá)情況及其與cMPDs分類、療效、并發(fā)癥發(fā)生率及預(yù)后之間的關(guān)系。通過JAK2 V617F突變率與ETS2mRNA表達(dá)情況的相關(guān)性研究，了解JAK2 V617F點(diǎn)突變與ETS2 mRNA表達(dá)水平的異常在cMPDs發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制，期望為尋找針對(duì)性治療方法奠定基礎(chǔ)。 方法： 1

4、 本實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象包括62例BCR/ABL陰性的cMPDs患者[26例PV、26例ET、9例IMF、1例慢性中性粒細(xì)胞性白血病(CNL)]；20例慢性粒細(xì)胞性白血病(CML)患者、10例急性白血病(AL)患者，15名健康志愿者。62例cMPDs患者為研究組、其他患者和正常人為對(duì)照組。所有病例符合WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)。 2 從各組患者及健康志愿者的骨髓或血液中提取單個(gè)核細(xì)胞，再從其中提取總RNA及DNA。 3 用半定量逆轉(zhuǎn)錄．聚合

5、酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)各組ETS2 mRNA的表達(dá)水平。 4 用等位基因特異性聚合酶鏈反應(yīng)(AS-PCR)篩選各組JAK2V617F點(diǎn)突變，根據(jù)檢查結(jié)果將62例cMPDs患者分為突變陽性組及陰性組。全部陽性標(biāo)本和隨機(jī)抽取的部分陰性對(duì)照標(biāo)本，經(jīng)PCR、產(chǎn)物純化后，進(jìn)行基因測(cè)序以驗(yàn)證突變結(jié)果。 5 分別觀察和比較各組病例的臨床特征，包括：性別、發(fā)病年齡、臨床癥狀及體征、血象、骨髓像、并發(fā)癥、療效和預(yù)后等。

6、6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用單因素方差分析比較ETS2 mRNA在MPD組、急性白血病組、慢性粒細(xì)胞白血病組與正常對(duì)照組中的表達(dá)水平有無差異；卡方檢驗(yàn)分析JAK2 V617F點(diǎn)突變率在各組的差異。ETS2 mRNA表達(dá)水平在cMPDs JAK2V617F點(diǎn)突變陽性組與陰性組比用t檢驗(yàn)。所有數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理。 結(jié)果： 1 62例BCR/ABL陰性的cMPDs患者中，共有44例患者檢測(cè)到JAK2 V617F點(diǎn)突

7、變，包括23/26(88.46％)例PV，15/26(57.69％)例ET，5/9(55.56％)例IMF。1/1(100.00％)例CNL。在CML、AL及健康志愿者中未檢測(cè)到JAK2 V617F點(diǎn)突變。 2 ETS2 mRNA表達(dá)水平在cMPDs組(平均值0.2876，陽性率81.96％)、CML組(平均值0.4133，陽性率85.0％)和AL(平均值0.5320，陽性率80.0％)組均顯著高于健康志愿者(平均值0.106，

8、陽性率46.7％)。cMPDs組、CML組、AL組之間比較，ETS2 mRNA表達(dá)水平均值無明顯差別。 3 在cMPDs組JAK2 V617F點(diǎn)突變陽性的病例中ETS2mRNA表達(dá)水平(平均值0.323，陽性率86.0％)明顯高于突變陰性病例(平均值0.203，陽性率72.2％)，差別有顯著意義，P=0.022。 4 臨床特征對(duì)比：PV患者中JAK2 V617F點(diǎn)突變陽性組的外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著高于陰性組(平均值18.2

9、×10<'9>/L vs7.6×10<'9>/L，P=0.035)，血小板計(jì)數(shù)顯著高于陰性組(平均值479×10<'9>/L vs 277×10<'9>/L，P=0.025)。ET患者中JAK2 V617F點(diǎn)突變陽性組的血紅蛋白顯著高于陰性組(平均值146g/L vs122g/L，P=0.001)，白細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著高于陰性組(平均值14.6×10<'9>/L vs 10.9×10<'9>/L，P=0.044)。在IMF患者中JAK2V61

10、7F點(diǎn)突變陽性組與陰性組之間的臨床特征無顯著性差異，P>0.05。 結(jié)論： 1 大部分cMPDs患者存在JAK2 V617F點(diǎn)突變(PV 88.46％、ET 57.69％、IMF 55.56％)，提示JAK2 V617F點(diǎn)突變所產(chǎn)生的激活作用是PV、ET、IMF的重要發(fā)病機(jī)制。 2 在JAK2 V617F點(diǎn)突變陽性的cMPDs患者中，ETS2 mRNA的表達(dá)水平高于JAK2 V617F點(diǎn)突變陰性的cMPDs患者