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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:近年來(lái)子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMs)發(fā)病率逐漸增高,但其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。目前有研究表明二惡英與EMs的發(fā)病有關(guān)系,但其促進(jìn)子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生發(fā)展的機(jī)制尚未闡明,有研究提示二惡英可能通過(guò)影響在位子宮內(nèi)膜組織正常的生物功能而誘發(fā)EMs的產(chǎn)生,胎兒期的二惡英暴露有可能增加成年期的患病風(fēng)險(xiǎn),且二惡英的持續(xù)暴露可能促進(jìn)EMs的發(fā)展。尚有研究報(bào)道TGF-β2、PR、MMP-3及MMP-7在維持正常的子宮內(nèi)膜生物功能
2、中發(fā)揮重要作用,本研究旨在檢測(cè)不同時(shí)期不同劑量的二惡英暴露小鼠在子宮內(nèi)膜異位癥模型狀態(tài)下在位子宮內(nèi)膜組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(transforming growth factor,TGF-β2),孕激素受體(progesterone receptor,PR)以及基質(zhì)金屬蛋白酶-3(matrixmetalloproteinase,MMP-3)和基質(zhì)金屬蛋白酶-7(matrix metalloproteinase,MMP-7)表達(dá),以探討TCD
3、D對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMs)發(fā)病的影響及其機(jī)制。
方法:
1、動(dòng)物模型的建立
選擇60只已孕無(wú)特殊病原體(specific pathogen free,SPF)級(jí)C57BL/6小鼠,其雌性子代在其不同的發(fā)育階段(包括胎兒期,青春期,成年期)給予TCDD暴露,分為五組0/0,0/3,3/0,3/3,3/10(對(duì)照組,青春期+成年期暴露組,胎兒期+成年期暴露組,胎兒期+青
4、春期+成年期暴露組,胎兒期+青春期+成年期高劑量暴露組)。并且在其生后第70天采用小鼠自體子宮內(nèi)膜移植法建立小鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型。術(shù)后3、6、9周各暴露一次TCDD3ug/kg。
2、后期指標(biāo)的檢測(cè)
建模術(shù)后12周將所有處理組的小鼠脫臼處死,取其在位子宮內(nèi)膜組織,用免疫組化PV法和Western-blot方法檢測(cè)TGF-β2、PR、MMP-3和MMP-7的表達(dá)并進(jìn)行比較。
3、所有數(shù)據(jù)采用SP
5、SS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以x±s表示,采用多個(gè)均數(shù)比較的方差分析,計(jì)數(shù)資料采用X2檢驗(yàn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果:
1、各組小鼠造模成功率的比較,采用行×列表的X2檢驗(yàn),對(duì)組間比較有顯著差異的數(shù)據(jù)進(jìn)行多個(gè)樣本率間的多重比較。
數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示各組間皮下種植成功率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),各組間腹膜種植成功率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)組間兩兩比較結(jié)果顯
6、示3/3組種植成功率顯著高于0/0組(P<0.00625)。各組間卵巢部位異位種植成功率無(wú)顯著差異(P>0.05)。0/0組中皮下、腹膜及卵巢異位種植成功率無(wú)顯著差異(P>0.05),0/3組中不同部位的異位種植成功率有顯著差異(P<0.05),不同部位兩兩比較發(fā)現(xiàn)皮下和腹膜,腹膜和卵巢部位的異位種植成功率無(wú)顯著差異(P>0.0125;P<0.0125),卵巢的異位種植成功率顯著高于皮下(P<0.0125)。3/0組中皮下、腹膜及卵巢異
7、位種植成功率具有顯著性差異(P<0.05)經(jīng)過(guò)組內(nèi)不同部位種植成功率的兩兩比較發(fā)現(xiàn)皮下和腹膜的異位種植成功率無(wú)顯著差異(P>0.0125),皮下和卵巢的異位種植成功率有顯著差異(P<0.0125),腹膜和卵巢的異位種植成功率無(wú)顯著差異(P>0.0125)3/3組中皮下、腹膜及卵巢部位的種植成功率有顯著差異(P<0.05),各部位種植成功率兩兩比較顯示皮下與腹膜,腹膜與卵巢種植成功率無(wú)顯著差異(P>0.0125;P>0.0125),卵巢部
8、位種植成功率顯著高于皮下種植成功率(P<0.0125),3/10組中皮下、腹膜及卵巢異位種植成功率有顯著差異(P<0.05),各部位兩兩比較顯示皮下與腹膜,腹膜與卵巢的異位種植成功率無(wú)顯著差異(P>0.0125;P>0.0125),卵巢部位的異位種植成功率顯著高于皮下種植成功率(P<0.0125)。研究還發(fā)現(xiàn)隨暴露劑量的增加異位灶外觀由小囊泡發(fā)展為大囊泡,內(nèi)有大量液體積聚,表面張力較大腹腔組織粘連嚴(yán)重。(見(jiàn)附圖2)
2、各
9、組小鼠在位子宮內(nèi)膜中TGF-β2和PR的表達(dá),兩個(gè)指標(biāo)在各組中的數(shù)據(jù)經(jīng)方差齊性檢驗(yàn),符合方差分析的條件,采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料的方差分析,各組數(shù)據(jù)經(jīng)比較有顯著差異的進(jìn)行多個(gè)樣本均數(shù)間的多重比較,采用LSD-t檢驗(yàn)。
PR及TGF-p2在0/0組與0/3組中的表達(dá)經(jīng)比較無(wú)顯著性差異(P>0.05,P>0.05),PR及TGF-β2在0/0組與3/0組的表達(dá)經(jīng)比較無(wú)顯著性差異(P>0.05,P>0.05),PR及TGF-β2在0
10、/0組與3/3組的表達(dá)經(jīng)比較具有顯著性差異,(P<0.05,P<0.05)。其在3/10組中的表達(dá)低于3/3組中的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
3、各組小鼠在位子宮內(nèi)膜中MMP-3及MM-7的表達(dá),兩個(gè)指標(biāo)在各組中的數(shù)據(jù)經(jīng)方差齊性檢驗(yàn),符合方差分析的條件,采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料的方差分析,各組數(shù)據(jù)經(jīng)比較有顯著差異的進(jìn)行多個(gè)樣本均數(shù)間的多重比較,采用LSD-t檢驗(yàn)。
MMP-3及MMP-7在0/0組與
11、0/3組中的表達(dá)經(jīng)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義(P>0.05,P>0.05)。MMP-3及MMP-7在0/0組與3/0組中的表達(dá)經(jīng)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義(P>0.05,P>0.05)。MMP-3及MMP-7在0/0組中的表達(dá)顯著低于3/3組及3/10組中的表達(dá)(P<0.05,P<0.05),其在3/10組中的表達(dá)高于3/3組中的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義((P<0.05,P<0.05)。
結(jié)論:
1、在不同時(shí)期及不同劑量的TC
12、DD暴露組小鼠進(jìn)行皮下、腹膜及卵巢部位的異位內(nèi)膜種植后,3/3組(胎兒期+青春期+成年期普通劑量暴露組)的腹膜種植成功率明顯高于0/0組(對(duì)照組即未暴露組)。在各個(gè)TCDD暴露組,與對(duì)照組不同的是卵巢部位的異位內(nèi)膜種植成功率明顯高于皮下種植的成功率。說(shuō)明TCDD暴露可促進(jìn)異位內(nèi)膜的種植。
2、3/10組(胎兒期+青春期+成年期高劑量TCDD暴露組)小鼠在位內(nèi)膜組織中TGF-β2和PR的表達(dá)明顯低于3/3組(胎兒期+青春期+
13、成年期普通劑量暴露組),而3/3組表達(dá)又明顯低于0/0組(即對(duì)照組),說(shuō)明TCDD可下調(diào)在位內(nèi)膜組織中TGF-β2和PR的表達(dá),且下調(diào)作用隨劑量的增加而逐漸增強(qiáng)。
3、3/10組(胎兒期+青春期+成年期高劑量TCDD暴露組)小鼠在位內(nèi)膜組織中MMP-3和MMP-7的表達(dá)明顯高于3/3組(胎兒期+青春期+成年期普通劑量暴露組),而3/3組表達(dá)又明顯高于0/0組(即對(duì)照組),說(shuō)明TCDD可上調(diào)在位內(nèi)膜組織中MMP-3和MMP-
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