轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β和基質(zhì)金屬蛋白酶在大鼠動(dòng)脈鈣化發(fā)病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:1.建立大鼠動(dòng)脈鈣化模型，觀察大鼠胸腹動(dòng)脈病理切片的差異。2.通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR法，檢測(cè)并觀察TGF-β和MMPs的mRNA在大鼠動(dòng)脈鈣化模型的表達(dá)情況，并探討和闡述其在大鼠動(dòng)脈鈣化形成過程中的作用及意義。3.通過安捷倫大鼠全基因組表達(dá)芯片檢測(cè)，觀察對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組大鼠動(dòng)脈鈣化的差異基因，并探討差異基因在大鼠動(dòng)脈鈣化形成過程的作用及意義。
　　方法:用隨機(jī)數(shù)字表法將60只SD雄性大鼠分成2組:正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組30只

2、。通過使用本課題研究人員方法，皮下注射維生素D3溶液建立大鼠動(dòng)脈鈣化模型。兩周后取大鼠胸腹主動(dòng)脈并分為兩部分，將一部分用于石蠟包埋，為下一步做蠟塊切片使用，將另一部分保存于液氮，為下一步提取RNA及全基因組表達(dá)芯片使用。通過蘇木精-伊紅(HE)染色法觀察兩組大鼠胸腹動(dòng)脈血管組織切片的病理差異，Von Kossa染色（鈣染色法）觀察兩組大鼠胸腹動(dòng)脈血管內(nèi)層膜組織切片的鈣鹽沉積程度;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定兩組大鼠動(dòng)脈TGF-β和MMPs的

3、mRNA表達(dá)量水平。Agilent大鼠全基因表達(dá)芯片檢測(cè)兩組大鼠動(dòng)脈血管組織的差異基因。
　　結(jié)果:1.Von Kossa染色結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組大鼠動(dòng)脈內(nèi)膜出現(xiàn)大片連續(xù)性黑褐色鈣鹽沉積，對(duì)照組大鼠動(dòng)脈組織則光滑完整，無黑褐色鈣鹽沉積。2.實(shí)時(shí)熒光PCR及大鼠全基因表達(dá)芯片結(jié)果顯示，在成功建立的大鼠動(dòng)脈鈣化模型中，實(shí)驗(yàn)組TGF-β的mRNA表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.05);3.實(shí)時(shí)熒光PCR及大鼠全基因表達(dá)芯片結(jié)果顯示，在成功