髓系細胞促發(fā)受體-1(TREM-1)在急性病毒性心肌炎中的作用及其機制研究.pdf

1、背景：
　　病毒性心肌炎是由病毒感染引起的心肌非特異性炎癥反應(yīng)及隨后的心肌細胞損傷，它的病理過程主要是與病毒對心臟的直接損傷和機體的自身免疫反應(yīng)有關(guān)。天然和獲得性免疫參與了病毒性心肌炎心肌損傷、慢性化及其擴張性心肌病的病理發(fā)生發(fā)展過程。病毒感染心臟后，可誘導大量炎癥細胞浸潤，炎性細胞因子分泌，如干擾素家族、白細胞介素家族、腫瘤壞死因子等均參與心肌炎的發(fā)生發(fā)展過程，然而其詳盡機制尚不明確，到目前為止，尚無特異性治療方法。因此，揭示病

2、毒性心肌炎發(fā)病過程中炎癥和免疫反應(yīng)的相互關(guān)系，以及其可能的機制，并進一步探討有效治療方案則成為病毒性心肌炎的研究熱點。
　　第一部分小鼠急性病毒性心肌炎模型的建立
　　目的：建立小鼠急性病毒性心肌炎模型，為進一步的研究發(fā)病機制和治療手段提供理想的動物模型。
　　方法：采用科薩奇B組3型病毒(CVB3)腹腔注射，接種BALB/c小鼠，建立小鼠急性病毒性心肌炎模型。BALB/c4周齡雄性小鼠50只，隨機分為模型組(40只)

3、和正常對照組(注射Eagle液0.3ml，10只)，模型組予腹腔接種CVB30.3ml。在接種病毒后第0、3、5、7、14、28天分別處死小鼠，觀察心肌病理形態(tài)學改變。
　　結(jié)果：模型組小鼠心肌HE染色可見明顯的炎性細胞浸潤和心肌壞死等炎癥改變，而對照組心肌無任何炎性細胞浸潤或心肌壞死。
　　結(jié)論：CVB3腹腔注射可誘導建立理想的心肌炎模型。
　　第二部分 TREM-1在急性病毒性心肌炎中的作用及其可能機制研究

4、　　目的：研究TREM-1、MyD88在急性病毒性心肌炎心肌組織中的表達。
　　方法：BALB/c4周齡雄性小鼠80只，隨機分為模型組(60只)和正常對照組(20只)，模型組予腹腔接種柯薩奇病毒B組3型(CVB3)建立小鼠急性病毒性心肌炎模型。光鏡觀察心肌病理形態(tài)學改變，采用聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)及ELISA技術(shù)，檢測各組小鼠心肌組織或血清中TREM-1、MyD88、TNF-α和IL-1基因水平及蛋白水平的變化，并用超聲技術(shù)檢測

5、小鼠心功能，Tunel技術(shù)檢測心肌細胞凋亡情況。
　　結(jié)果：與正常組比較，模型組小鼠心肌HE染色可見明顯的炎性細胞浸潤和心肌壞死等炎癥改變，TREM-1、TNF、IL-1 mRNA和蛋白水平以及MyD88蛋白水平顯著升高，心肌細胞凋亡明顯增多，心功能指標EF、FS降低。
　　結(jié)論：病毒性心肌炎模型中，炎性細胞因子TNF、IL-1和炎癥放大介質(zhì)TREM-1及其下游蛋白MyD88在mRNA、蛋白水平的表達都發(fā)生改變，伴隨心功能和

6、心肌細胞凋亡的變化，TREM-1和下游蛋白MyD88蛋白變化可能與病毒性心肌炎炎癥放大作用有關(guān)。
　　第三部分 LP-17對小鼠急性病毒性心肌炎的干預作用
　　目的：觀察LP-17對CVB3誘導的病毒性心肌炎的作用并研究其可能機制。方法：BALB/c4周齡雄性小鼠70只，隨機分為正常對照組、LP-17對照組(以上兩組均予以不含病毒的Eagle's液腹腔注射)、模型組和LP-17治療組和(以上兩組予以柯薩奇病毒腹腔接種)。其中

7、LP-17治療組在病毒接種第3、5天，分別給予腹腔注射LP-17200μg。接種后的第7天處死所有小鼠，取小鼠心臟行組織病理學染色，觀察小鼠心肌病理形態(tài)學改變；采用聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)技術(shù)和ELISA技術(shù)，檢測各組小鼠心肌中或血清中TNF-α、IL-1、TREM-1、MyD88在mRNA和蛋白表達的變化；同時采用心臟超聲技術(shù)觀察心功能變化，利用Tunel技術(shù)觀察心肌組織凋亡情況。
　　結(jié)果：模型組小鼠心肌HE染色可見明顯的炎性

8、細胞浸潤和心肌壞死斷裂等炎癥改變；心功能指標EF和FS顯著減低；心肌細胞凋亡明顯增多。而LP-17治療組炎癥改變均有明顯減輕；心功能指標改善；心肌細胞凋亡減少。TNF-α、IL-1mRNA水平均較模型組下降。經(jīng)統(tǒng)計學處理，各個觀察指標P值均<0.01，差異有統(tǒng)計學意義。TNF-α、IL-1血清蛋白水平變化與心肌基因水平變化相一致。模型組心肌組織MyD88表達明顯升高，而在LP-17治療組，MyD88mRNA和蛋白水平表達量均顯著減低，差