致瀉性大腸埃希菌流行狀況及耐藥性研究.pdf

1、目的:對(duì)杭州地區(qū)不同來(lái)源的致瀉性大腸埃希菌(DiarrheagenicEscherichia coli, DEC)的流行分布狀況、毒力基因、耐藥性及耐藥基因進(jìn)行研究。
　　方法:收集人、動(dòng)物和水環(huán)境分離的大腸埃希菌（Escherichia coli，E.coli）共790株。采用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜進(jìn)行菌株鑒定;多重聚合酶鏈反應(yīng)(multiplex Polymerase Chain Reaction，mPCR)擴(kuò)增毒力

2、基因(bfpB、escV、astA、stx1、stx2、pic、elt、 estIb、estIa、invE和aggR)，篩選致瀉性大腸埃希菌;紙片擴(kuò)散法和全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀和藥敏系統(tǒng)進(jìn)行藥敏試驗(yàn);PCR檢測(cè)耐藥菌株的耐藥基因;多位點(diǎn)序列分析、系統(tǒng)發(fā)育分型和脈沖場(chǎng)凝膠電泳進(jìn)行分子分型及其同源性分析。
　　結(jié)果:790株E.coli（急腹癥患者269株、住院患者66株、兒童患者103株、健康體檢者106株、農(nóng)場(chǎng)豬68株、寵物狗85株和水

3、環(huán)境93株）中分離到19株腸致病性大腸埃希菌(Enteropathogenic E.coli，EPEC)、11株腸產(chǎn)毒素性大腸埃希菌(Enterotoxigenic E.coli，ETEC)、85株腸粘附性大腸埃希菌(Enteroaggregative E.coli，EAEC)，分離率分別為2.4％、1.4％、10.8％，未分離到腸出血性大腸埃希菌(Enterohemorrhagic E.coli，EHEC)和腸侵襲性大腸埃希菌(Ent

4、eroinvasive E.coli，EIEC)。EAEC、EPEC和ETEC菌株對(duì)頭孢菌素類抗生素耐藥率均高于18％，喹喏酮類抗生素耐藥率均高于9％，EAEC菌株中對(duì)亞胺培南的耐藥率為2.4％。耐藥基因檢測(cè)結(jié)果顯示，19株EPEC菌株中，1株攜帶blaCTX-M-123基因，2株攜帶blaCTX-M-14基因，對(duì)喹諾酮類耐藥的2株菌株中，1株菌株同時(shí)攜帶qnrS1、oqxAB和qepA耐藥基因，另一株有aac(6')-Ib-Cr基因;

5、11株ETEC菌株攜帶blaCTX-M-55和blaCTX-M-14基因各1株，其中有1株菌株攜帶喹諾酮耐藥基因qnrS1;85株EAEC中有25株攜帶bla CTX-M-14基因，19株攜帶blaTEM基因，15株菌株含有質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮耐藥基因oqxAB,其中2株菌株同時(shí)攜帶qnrS2、oqxAB和aac(6')-Ib-cr基因，同時(shí)，分離到的2株EAEC菌株攜帶blaKPC-2基因。
　　EPEC毒力基因結(jié)果顯示bfpB檢出

6、率為5.3％(1/19)，escV為100％(19/19)。ETEC菌株中，elt檢出率為45.5％(5/11)基因，estIb基因?yàn)?4.5％(6/11)，未檢測(cè)到estIa基因。EAEC菌株中，astA最為常見(jiàn)，占89.4％(76/85)。MLST和系統(tǒng)發(fā)育分型結(jié)果顯示，EPEC菌株中，ST10-A為最常見(jiàn)的型別，在人和寵物中均檢測(cè)到;ETEC中，CC10-A型最為常見(jiàn)，占到36.4％; EAEC中，發(fā)現(xiàn)57個(gè)不同的ST型，其中，C

7、C10和ST38為最多，占到22.4％(19/85)，A和D型占72.9％(62/85)。在EPEC和ETEC菌株中，PFGE結(jié)果顯示菌株間無(wú)同源性，EAEC中，不同來(lái)源的住院患者和兒童門(mén)診分離樣本中各有2株細(xì)菌具有同源性，為同一克隆株。
　　結(jié)論:1.在杭州地區(qū)流行的致瀉性大腸埃希菌主要為EAEC、EPEC和ETEC，其中EAEC是檢出最多的腸道致瀉性大腸埃希菌，分布在人、動(dòng)物和環(huán)境中，CC10和ST38型是檢出最多的型別，EP

8、EC和ETEC菌株主要分布在急腹癥患者中，其中非典型EPEC是EPEC中分離最多的菌株，為94.7％，ST10型是最常見(jiàn)的型別。
　　2、致瀉性大腸埃希菌對(duì)臨床常用抗生素有一定的耐藥性。國(guó)內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)對(duì)碳青霉烯類抗生素耐藥的產(chǎn)blaKPC-2的EAEC菌株;國(guó)內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)攜帶4種喹諾酮耐藥基因qnrS1、oqxA、oqxB和qepA的EPEC菌株。
　　3.astA是EAEC中最常見(jiàn)的毒力基因，elt和estIb是ETEC最常見(jiàn)