吸入低濃度一氧化碳對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷的作用.pdf

1、腎缺血再灌注(IR)損傷主要發(fā)生于創(chuàng)傷應(yīng)激、失血性休克、腎臟手術(shù)及腎移植患者的轉(zhuǎn)歸過程中。防治腎IR損傷是救治此類患者的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。研究表明,IR損傷是一種缺血后炎性損傷,主要由缺血區(qū)細(xì)胞產(chǎn)生釋放的活性氧物質(zhì)及炎癥介質(zhì)介導(dǎo)引發(fā)。在對(duì)氣體信使分子一氧化碳(CO)的研究中發(fā)現(xiàn),CO具有抗炎、抗氧化損傷的重要功效。本課題組先前的研究證實(shí),給予適量外源性CO,對(duì)肢體IR引發(fā)的腎等遠(yuǎn)隔器官損傷具有顯著的對(duì)抗作用。另有報(bào)道,給予外源性CO(體積分

2、數(shù)為0.05％)對(duì)移植腎有保護(hù)作用。以上研究結(jié)果顯示,CO對(duì)直接及間接腎IR損傷均有防治效應(yīng),進(jìn)一步系統(tǒng)探討CO對(duì)腎臟IR損傷的作用及其規(guī)律,可為上述患者的救治提供新的應(yīng)對(duì)策略。
　　 目的:本實(shí)驗(yàn)擬通過夾閉及再開放腎動(dòng)脈的方法復(fù)制腎IR損傷模型,使模型動(dòng)物吸入不同濃度(體積分?jǐn)?shù)在安全范圍內(nèi))的CO后,觀測(cè)腎功能及病理學(xué)指標(biāo)的變化,以探討不同濃度的CO對(duì)腎IR損傷的效應(yīng)。
　　 方法:(1)動(dòng)物分組:健康清潔級(jí)SD大鼠3

3、0只,雌雄不拘,體重250-300g,隨機(jī)分為:假手術(shù)(S)組,6只;IR組,6只;IR吸入CO(RC)組,18只,分為RC0.025、RC0.05及RC0.075三個(gè)濃度組,每組吸入CO的體積分?jǐn)?shù)分別為0.025％、0.05％、0.075％。(2)模型復(fù)制:在麻醉狀態(tài)下,暴露并游離雙側(cè)腎蒂,用無創(chuàng)血管夾將其夾閉,45 min后,去掉血管夾實(shí)施再灌注,以此制得大鼠腎IR模型。S組模擬手術(shù)過程,但不造成腎缺血。(3)吸入CO的方法:RC組

4、動(dòng)物吸入CO,把動(dòng)物置于特制的器皿中,通入含有CO的醫(yī)用空氣,CO的體積分?jǐn)?shù)分別為0.025％、0.05％、0.075％。于術(shù)前1 h和術(shù)后6h持續(xù)吸入CO。S、IR組暴露于空氣中,自由呼吸。(4)取材觀測(cè):IR、RC0.025、RC0.05及RC0.075組于再灌注到6 h時(shí),S組于對(duì)應(yīng)的時(shí)間點(diǎn),在深度麻醉下,經(jīng)右心房采血各5 ml,靜置,離心,取上清液送全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血鉀(K+)、肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)等腎功能指標(biāo),

5、開腹取腎分別做以下觀測(cè):對(duì)腎的色澤、質(zhì)地及滲出情況進(jìn)行大體觀察、照相;取右側(cè)腎臟進(jìn)行濕干重比值測(cè)定,用電子分析天平測(cè)量濕重,在60℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中干燥7天,待水分完全析出后測(cè)其干重,算得濕干重比值;取左腎石蠟包埋切片、HE染色,行組織病理學(xué)觀察。
　　 結(jié)果:(1)大體觀察:S組,腎的顏色暗紅,彈性好,無出血及滲出物;IR組,腎色澤深暗,呈褐色,明顯腫脹,彈性差,腎皮質(zhì)內(nèi)有片狀出血點(diǎn);RC組,腎的顏色介于S與IR組之間,觸之彈

6、性較IR組好,皮質(zhì)內(nèi)出血點(diǎn)較IR組明顯減少。(2)濕干重比值:IR組＞RC0.025組＞RC0.05組＞RC0.075組＞S組。IR組和其余各組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);S組和其余各組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);RC0.05和RC0.075組相比,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。(3)HE染色觀察:S組,腎小球、腎小管上皮細(xì)胞無腫脹及變性,細(xì)胞形態(tài)正常,管腔大小正常,腎血管內(nèi)可見聚集成堆的紅細(xì)胞。IR組,腎小管上皮腫脹嚴(yán)

7、重,上皮細(xì)胞廣泛變性、壞死、脫落,管腔變窄或閉合,部分管腔變寬大,管腔內(nèi)有壞死細(xì)胞聚集形成的細(xì)胞管型及大量絮狀物。腎小球及球后毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹,血管內(nèi)淤積大量結(jié)構(gòu)破壞的紅細(xì)胞及血紅蛋白,腎間質(zhì)充血及出血明顯,伴有炎細(xì)胞浸潤(rùn)。RC組,與S組比較仍呈現(xiàn)異常表現(xiàn),但與IR組比較病變較輕,尤以RC0.075呈現(xiàn)明顯改善。腎小管部分上皮細(xì)胞腫脹,脫落及空泡變性,壞死細(xì)胞較少,腎小管形狀保持良好,管腔內(nèi)可見蛋白管型及絮狀物,壞死細(xì)胞聚集形成的細(xì)