吸入一氧化碳防治肢體缺血再灌注損傷.pdf

1、肢體缺血再灌注(IR)損傷發(fā)生于肢體擠壓傷、斷肢再植術(shù)等患者的轉(zhuǎn)歸過程中。防治IR損傷是救治此類患者的一個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。研究表明，IR損傷是一種缺血后炎性損傷，主要由缺血區(qū)細胞產(chǎn)生釋放的活性氧物質(zhì)及炎癥介質(zhì)介導(dǎo)引發(fā)。在對氣體信使分子一氧化碳(CO)的研究中發(fā)現(xiàn)，CO具有抗炎、抗氧化損傷的重要功效。本課題組先前的研究證實，給予適量外源性的CO，對肢體IR引發(fā)的遠隔器官損傷，具有顯著的對抗作用，但給予外源性CO對發(fā)生缺血的肢體有何影響，尚缺乏細

2、致的觀察研究。 目的：觀察研究吸入適量外源性CO對肢體IR損傷的防治作用。 方法：健康清潔雄性SD大鼠44只，體重250-300g，隨機分為：假手術(shù)(S)組，4只；IR組，20只；IR吸入CO(RC)組，20只。在后肢根部夾閉股動脈，并用橡皮筋綁扎后肢根部，使一側(cè)后肢持續(xù)缺血4 h，去血管夾及橡皮筋行再灌注48h，制得大鼠肢體IR模型。S組模擬手術(shù)過程，但不造成肢體缺血。S、IR組于手術(shù)后4 h時，開始持續(xù)吸入標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)用空

3、氣4 h，此后每間隔12 h吸入一次，每次4 h，共計3次，合計12 h。RC組于手術(shù)后4 h時，開始持續(xù)吸入含有CO(500p.p.m)的醫(yī)用空氣，吸入時間、間隔及次數(shù)，與S、IR組保持相同。各組均取一半大鼠，于再灌注到48 h時，從髖關(guān)節(jié)處截取IR肢體，做以下觀測：用電子分析天平測量其濕重，并對肢體肌肉的顏色、斷端滲血的顏色，進行觀察、照相；其后，在60℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中干燥7天，待肢體水分完全析出后測其干重，算得濕干重比值。各組剩

4、余半數(shù)大鼠，于再灌注到48h時，采血行乳酸脫氫酶(LDH)和肌酸激酶(CK)檢查，以測得骨骼肌的損害程度；取IR肢體小腿肌肉行HE染色、橫紋肌染色；應(yīng)用流式細胞儀檢測IR肢體小腿肌肉凋亡百分比及Bax、Bcl-2的表達變化。結(jié)果：(1)大體觀察：S組肢體肌肉顏色暗紅、形態(tài)正常，皮下無出血及滲出物；IR組肢體明顯腫脹，色澤深暗，成褐色，皮下組織內(nèi)、肌間隔內(nèi)有血色滲出液，并可見大量淺黃色、膠狀滲出物；RC組肢體的腫脹程度較IR組明顯減輕，顏

5、色較IR組顯蒼白，皮下組織、肌間隔內(nèi)血色滲出液及膠狀滲出物明顯減少。(2)濕干重比值：S組＜RC組＜IR組。IR組和RC組相比，有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，RC組與S組相比，無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。(3)HE染色觀察：S組，骨骼肌細胞形態(tài)正常，胞漿均勻、紅染，胞核無變形，核仁清晰；肌束明顯，胞間無炎性細胞浸潤。IR組，骨骼肌細胞胞體增大，部分肌細胞變性、壞死，肌漿溶解、破壞，胞核消失，呈空泡狀；肌束斷裂，胞間有大量的中性粒細胞浸

6、潤，并廣泛出血。RC組，可見部分肌細胞變性，肌漿含有空泡，呈灶狀溶解，大部分肌細胞腫大程度減輕，肌漿染色接近正常，胞核染色及位置趨近正常，未見核固縮；骨骼肌細胞間僅有少量單核細胞浸潤，出血減輕。(4)橫紋肌染色觀察：S組，可見骨骼肌肌纖維排列整齊，無斷裂，形態(tài)正常；高倍鏡下肌纖維排列均勻、整齊，橫紋清晰。IR組，肌細胞變性、壞死；肌纖維排列紊亂、扭曲，部分斷裂； 骨骼肌橫紋結(jié)構(gòu)不清，部分消失。RC組，肌纖維排列基本正常，橫紋明顯

7、，整齊，僅見局灶性橫紋排列紊亂。(5)血清檢測結(jié)果：S組，血清LDH、CK值最低，處于基礎(chǔ)水平，在正常參照范圍之內(nèi)；IR組，血清LDH、CK值最高；RC組血清LDH、CK值居中。IR組和RC組相比，有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)；RC組和S組相比，仍有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。(6)流式細胞檢測結(jié)果：骨骼肌細胞凋亡百分比：S組最低，RC組居中，IR組最高；IR組和RC組相比，有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)；RC組和S組相比，無統(tǒng)計學(xué)差異(