重組噬菌體口服疫苗誘導系統(tǒng)性的細胞免疫反應及其體內抗腫瘤效果研究.pdf

1、該課題以E.G7-OVA細胞構建的C57BL/6(H-2K<'b>荷瘤小鼠為模型,進行了口服呈現(xiàn)CTL表位OVA<,257-264>肽(SIINFEKL)的噬菌體顆粒的體內免疫效應和抗腫瘤效果研究.首先構建gpⅧ呈現(xiàn)CTL表位OVA<,257-264>肽(SIINFEKL)的重組噬菌體.實驗采取定點突變、PCR擴增、T載體連接等分子克隆手段,通過一系列亞克隆步驟,在M13KE噬菌體結構蛋白的擴增片段中引入PvuII和BamHI兩個限制性

2、酶切位點,合成帶有XbaI和EcoRV酶切位點并含CTL表位SIINFEKL肽的寡核苷酸序列,將其連入M13KE噬菌體的gⅧ的N末端.使重組絲狀噬菌體M13KEova能夠表達帶有MHC-I類分子H-2K<'b>限制性的CTL表位的融合蛋白.通過限制性酶切,鑒定M13KE RF DNA帶有克隆入的OVA寡核苷酸序列;用重組噬菌體體外超感染XL1-Blue大腸桿菌,回收擴增的重組噬菌體病毒顆粒,采用H.Schagger和G.Von Jago

3、w建立的低分子量蛋白質凝膠電泳方法鑒定,證實所構建的重組噬菌體M13KEova表達gpⅧ和OVA<,257-264>肽的融合蛋白.重組噬菌體聯(lián)合粘膜免疫佐劑CT及CTB口服免疫C57BL/6(H-2K<'b>小鼠,并且轉染了pAc-neo-OVA質粒的EL4細胞(E.G7-OVA細胞)構建預防性腫瘤保護動物模型,通過監(jiān)測腫瘤的生長情況和荷瘤小鼠的存活率觀察表位呈現(xiàn)重組噬菌體的體內免疫效應.該研究結合噬菌體呈現(xiàn)技術、基于表位設計疫苗和口服