氨磷汀和峰齡多糖對(duì)人粒-巨噬祖細(xì)胞的刺激增殖及化療保護(hù)作用.pdf

1、目的：研究氨磷汀(Amifostine，化學(xué)代號(hào)WR-2721)和峰齡多糖(Fenglingpolysaccharide，F(xiàn)LPS)對(duì)人粒-巨噬祖細(xì)胞(CFU-GM)的刺激增殖及化療保護(hù)作用。 方法：(1)取機(jī)采外周血干細(xì)胞樣本，應(yīng)用淋巴細(xì)胞分離液(Ficoll)分離單個(gè)核細(xì)胞(MNC)，經(jīng)與WR-2721和FLPS作用后，采用甲基纖維素半固體培養(yǎng)法測(cè)定CFU-GM集落產(chǎn)率。觀察WR-2721和FLPS對(duì)人CFU-GM的刺激增殖

2、作用。(2)WR-2721及FLPS處理的MNC，與化療藥物(依托泊甙，VP16)作用后，測(cè)定CFU-GM集落產(chǎn)率，研究WR-2721和FLPS對(duì)人CFU-GM的保護(hù)作用。(3)采用XTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖及藥物敏感性，用Annexin/PI雙染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期，研究WR-2721對(duì)白血病細(xì)胞系HL-60細(xì)胞增殖與凋亡的影響，觀察WR-2721對(duì)HL-60細(xì)胞有無保護(hù)作用。(4)含有FLPS的HL60細(xì)胞懸液與VP1

3、6作用14h后，用XTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，觀察FLPS對(duì)HL60細(xì)胞的化療損傷有無保護(hù)作用。 結(jié)果：(1)經(jīng)0.01-5.0mmol/LWR-2721、37℃作用30分鐘的MNC以及FLPS濃度為0.5-25μg/ml時(shí)CFU-GM集落數(shù)均顯著高于對(duì)照組，p＜0.05，且集落較大。CFU-GM平均集落數(shù)在對(duì)照組，WR-2721(1mmol/L)組，F(xiàn)LPS(5μg/ml)組和WR-2721+FLPS組分別為每105MNC91.4

4、±50.4，119.8±62.9，143.2±76.4和179.2±97.6，與對(duì)照組相比，各組間差異有顯著性，p＜0.05：WR-2721+FLPS組CFU-GM集落數(shù)顯著高于WR-2721和FLPS組，p值分別小于0.01和0.05。(2)經(jīng)WR-2721和FLPS處理的MNC與VP1637℃作用14h后，CFU-GM集落產(chǎn)率均明顯高于VP16對(duì)照組，CFU-GM集落數(shù)在VP16對(duì)照組、空白對(duì)照組、WR-2721+VP16組、FLP

5、S+VP16組和WR-2721+FLPS+VP16組分別為每105MNC30.9±22.5、83.2±43.8、64.6±41.2、55.3±33.5和78.3±48.2，與VP16對(duì)照組相比，P值均＜0.01。(3)WR-2721對(duì)HL-60細(xì)胞增殖呈濃度時(shí)間依賴性抑制，0.5mmol/LWR-2721、37℃處理30min后的HL-60細(xì)胞對(duì)VP16的敏感性增強(qiáng)，細(xì)胞存活率減少50％的VP16濃度(IC50)由52.5μg/ml下降

6、為40.5μg/ml；5.0mmol/L的WR-2721作用72后，早期細(xì)胞凋亡由5.5％±1.9％增加至48.5％±8.4％(p＜0.001)，晚期細(xì)胞凋亡由1.2％±0.5％增加至39.0％±4.0％(p＜0.001)，并出現(xiàn)G2-M期細(xì)胞阻滯。(4)含和不含峰齡多糖的HL60細(xì)胞懸液與VP16作用14h后的細(xì)胞存活率無差異，重復(fù)21次的平均值分別為(90.5±2.9)％、(88.0±2.3)％，p＞0.05。 結(jié)論：(1)